杜仲葉抗疲勞活性成分的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定

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1、杜仲葉抗疲勞活性成分的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定摘要杜仲(EueommiaUlmoides)是我國特有經(jīng)濟(jì)林木，是一種名貴中藥材。杜仲味甘、性溫，具有很好的降血壓、補(bǔ)腎、益肝、強(qiáng)筋骨及安胎等功效，常以皮入藥。研究證明杜仲葉和杜仲皮中的生物功效成分大體一致，很多研究人員對杜仲葉提取物的抗疲勞功效進(jìn)行了研究，初步研究表明杜仲葉的提取物具有一定的抗疲勞功效。目前，杜仲葉抗疲勞生物功效成分和作用機(jī)理的研究只是停留在表面(功效成分不清楚，作用機(jī)理不明確)，因此對杜仲葉提取物的抗疲勞功效成分進(jìn)一步探索具有很重要的意義。本文采取溶劑提取和超聲波輔助提取方法對杜仲葉生物功效成分進(jìn)行提取，并通過大孔樹脂分離、溶劑萃取

2、、薄層層析和硅膠柱層析等方法對杜仲葉粗提物進(jìn)行分離純化。最后，采用紫外、紅外等手段對純化產(chǎn)品進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。杜仲葉成分提取、分離和純化的過程中，同步進(jìn)行小鼠抗疲勞試驗(yàn)，從而對杜仲葉中抗疲勞等生物功效成分進(jìn)行跟蹤并確定，為以杜仲葉為原料的研究和應(yīng)用提供合理、科學(xué)依據(jù)。本論文完成的研究內(nèi)容如下：(1)考察了杜仲葉提取各因素對黃酮類化合物得率和多酚得率的影響，通過正交試驗(yàn)得到黃酮類化合物最佳提取工藝為：超聲波功率600W，超聲波時(shí)間30min，乙醇濃度60％，料液比1：15，提取兩次，在最佳條件下總黃酮得率為2．04％；得到多酚最佳提取工藝為：超聲波功率800W，超聲波提取時(shí)間60min，乙醇濃度4

3、0％，料液比1：10的條件下提取兩次，多酚得率為O．175％。(2)杜仲葉提取物對自由基(DPPH-)清除作用大小順序?yàn)椋?5％乙醇提取物>甲醇提取物>乙酸乙酯提取物>丙酮提取物；不同濃度乙醇的杜仲葉提取物對自由基(DPPH·)清除率大小順序?yàn)椋?0％>95％>30％(乙醇提取物)；60％乙醇提取物經(jīng)大孔樹脂吸附后，不同濃度乙醇洗脫組分清除率大小順序?yàn)?0％>90％>30％(乙醇洗脫物)。(3)小鼠抗疲勞試驗(yàn)表明，杜仲葉經(jīng)過提取、分離和純化后得到的黃酮類化合物能有效延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，能增加小鼠運(yùn)動(dòng)后的血清LD，降低血清BUN，增加血清LDH活性，降低肝糖原和肌糖原含量；得到綠原酸不能延長

4、小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，能增加小鼠運(yùn)動(dòng)后的血清LD，降低血清BUN，增加血清LDH活性，降低肝糖原和肌糖原含量。(4)小鼠耐缺氧試驗(yàn)表明，杜仲葉經(jīng)過提取、分離和純化后得到的黃酮類化合物和綠原酸都具有耐缺氧功能，且黃酮類化合物較綠原酸效果好。(5)體內(nèi)抗氧化試驗(yàn)表明，杜仲葉經(jīng)過提取、分離和純化后得到的黃酮類化合物能增311d,鼠運(yùn)動(dòng)后血清MDA含量，增加T-SOD活力，增強(qiáng)血清GSH—PX活力O，得到的綠原酸減少小鼠運(yùn)動(dòng)后血清MDA含量，降低T-SOD活力，增強(qiáng)血清GSH．PX活力。(6)杜仲葉經(jīng)提取、分離和純化得到四個(gè)單體化合物，采用紫外、紅外等方法對其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)初步鑒定。關(guān)鍵詞：杜仲葉，有效成分

5、，抗疲勞，分離純化，結(jié)構(gòu)鑒定UTHEPURIFICATIoNANDSTRUCTUREIDENTIFICATIoNoFANTI—FATIGUEDACTIVEINGREDIENTSFRoMEUCOMMIALEAVESABSTRACTEucommiaUlmoidesiSakindofspecialplantinChina，itiSalsoararemedicine．ManyeffectsofEucommiaUlmoideshasbeenstudied，suchasloweringbloodpressure，tonifyingkidney,salutarytoliver,strengtheningi

6、ngtendonsandbones，goodtotocolysis，etc．Studyshowsthattheeffectivecompoundsofleaveshavenodistinctionwithbarksgenerally,ithasbeenindicatedbylotsofresearchersthattheextractofEucommiaUlmoidesleaveshastheanti．fatiguefunction．Buttheactiveingredientsandtheanti-fatiguemechanismareindeterminate，anditWasveryi

7、nterestingtostudytheEucommiaUlmoidesleavesanditsactiveingredientswithanti-fatiguefunction．nisstudyaimstoobtaintheeffectivecompoundsoftheEucommiaUlmoides1eavesbysolventextractionandultrasonicassistedextracti