杜仲葉抗疲勞活性成分的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定

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1、杜仲葉抗疲勞活性成分的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定摘要杜仲(EueommiaUlmoides)是我國特有經(jīng)濟林木，是一種名貴中藥材。杜仲味甘、性溫，具有很好的降血壓、補腎、益肝、強筋骨及安胎等功效，常以皮入藥。研究證明杜仲葉和杜仲皮中的生物功效成分大體一致，很多研究人員對杜仲葉提取物的抗疲勞功效進行了研究，初步研究表明杜仲葉的提取物具有一定的抗疲勞功效。目前，杜仲葉抗疲勞生物功效成分和作用機理的研究只是停留在表面(功效成分不清楚，作用機理不明確)，因此對杜仲葉提取物的抗疲勞功效成分進一步探索具有很重要的意義。本文采取溶劑提取和超聲波輔助提取方法對杜仲葉生物功效成分進行提取，并通過大孔樹脂分離、溶劑萃取

2、、薄層層析和硅膠柱層析等方法對杜仲葉粗提物進行分離純化。最后，采用紫外、紅外等手段對純化產(chǎn)品進行結(jié)構(gòu)鑒定。杜仲葉成分提取、分離和純化的過程中，同步進行小鼠抗疲勞試驗，從而對杜仲葉中抗疲勞等生物功效成分進行跟蹤并確定，為以杜仲葉為原料的研究和應(yīng)用提供合理、科學(xué)依據(jù)。本論文完成的研究內(nèi)容如下：(1)考察了杜仲葉提取各因素對黃酮類化合物得率和多酚得率的影響，通過正交試驗得到黃酮類化合物最佳提取工藝為：超聲波功率600W，超聲波時間30min，乙醇濃度60％，料液比1：15，提取兩次，在最佳條件下總黃酮得率為2．04％；得到多酚最佳提取工藝為：超聲波功率800W，超聲波提取時間60min，乙醇濃度4

3、0％，料液比1：10的條件下提取兩次，多酚得率為O．175％。(2)杜仲葉提取物對自由基(DPPH-)清除作用大小順序為：95％乙醇提取物>甲醇提取物>乙酸乙酯提取物>丙酮提取物；不同濃度乙醇的杜仲葉提取物對自由基(DPPH·)清除率大小順序為：60％>95％>30％(乙醇提取物)；60％乙醇提取物經(jīng)大孔樹脂吸附后，不同濃度乙醇洗脫組分清除率大小順序為60％>90％>30％(乙醇洗脫物)。(3)小鼠抗疲勞試驗表明，杜仲葉經(jīng)過提取、分離和純化后得到的黃酮類化合物能有效延長小鼠負重游泳時間，能增加小鼠運動后的血清LD，降低血清BUN，增加血清LDH活性，降低肝糖原和肌糖原含量；得到綠原酸不能延長

4、小鼠負重游泳時間，能增加小鼠運動后的血清LD，降低血清BUN，增加血清LDH活性，降低肝糖原和肌糖原含量。(4)小鼠耐缺氧試驗表明，杜仲葉經(jīng)過提取、分離和純化后得到的黃酮類化合物和綠原酸都具有耐缺氧功能，且黃酮類化合物較綠原酸效果好。(5)體內(nèi)抗氧化試驗表明，杜仲葉經(jīng)過提取、分離和純化后得到的黃酮類化合物能增311d,鼠運動后血清MDA含量，增加T-SOD活力，增強血清GSH—PX活力O，得到的綠原酸減少小鼠運動后血清MDA含量，降低T-SOD活力，增強血清GSH．PX活力。(6)杜仲葉經(jīng)提取、分離和純化得到四個單體化合物，采用紫外、紅外等方法對其進行了結(jié)構(gòu)初步鑒定。關(guān)鍵詞：杜仲葉，有效成分

5、，抗疲勞，分離純化，結(jié)構(gòu)鑒定UTHEPURIFICATIoNANDSTRUCTUREIDENTIFICATIoNoFANTI—FATIGUEDACTIVEINGREDIENTSFRoMEUCOMMIALEAVESABSTRACTEucommiaUlmoidesiSakindofspecialplantinChina，itiSalsoararemedicine．ManyeffectsofEucommiaUlmoideshasbeenstudied，suchasloweringbloodpressure，tonifyingkidney,salutarytoliver,strengtheningi

6、ngtendonsandbones，goodtotocolysis，etc．Studyshowsthattheeffectivecompoundsofleaveshavenodistinctionwithbarksgenerally,ithasbeenindicatedbylotsofresearchersthattheextractofEucommiaUlmoidesleaveshastheanti．fatiguefunction．Buttheactiveingredientsandtheanti-fatiguemechanismareindeterminate，anditWasveryi

7、nterestingtostudytheEucommiaUlmoidesleavesanditsactiveingredientswithanti-fatiguefunction．nisstudyaimstoobtaintheeffectivecompoundsoftheEucommiaUlmoides1eavesbysolventextractionandultrasonicassistedextracti