yb-1抑制三氧化二砷誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞自噬及其機(jī)制的研究

yb-1抑制三氧化二砷誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞自噬及其機(jī)制的研究

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1、江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文YB--1抑制三氧化二砷誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞自噬及其機(jī)制的研究姓名:龍璐璐申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師:許文林20120607江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要目的:1通過轉(zhuǎn)染SiRNA干擾人YB.1基因的質(zhì)粒(SiYB.1)和攜帶人YB.1基因的腺病毒表達(dá)載體pAdIEasy/YB.1(AdYB.1),探討YB.1與小劑量三氧化二砷(As203)誘導(dǎo)的乳腺癌MCF.7細(xì)胞及胃癌BGC.823細(xì)胞自噬的關(guān)系。2.從自噬相關(guān)基因Beclin1和Bcl.2調(diào)控細(xì)胞自噬的機(jī)制著手在基因和蛋白水平初步

2、探討YB.1調(diào)控自噬的機(jī)制。方法:1.Western.blot方法檢測脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染SiRNA干擾YB.1和腺病毒轉(zhuǎn)染pAdlEasy/YB.1過表達(dá)YB.1的MCF.7細(xì)胞和BGC.823細(xì)胞中YB.1蛋白表達(dá)的變化。2.4I.tM/LAs203作用于轉(zhuǎn)染SiYB.1和AdYB.1的MCF.7細(xì)胞及BGC.823細(xì)胞,運(yùn)用Western.blot的方法檢測各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中自噬標(biāo)記蛋白LC3.II和p62的表達(dá),MDC自噬特異性染料熒光染色觀察自噬泡的聚集綜合評價(jià)YB.1對As203誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞自噬的影響。3.

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)和Western.blot的方法檢測自噬相關(guān)基因Beclin1和Bcl.2在MCF.7細(xì)胞及BGC.823細(xì)胞各轉(zhuǎn)染組中的mRNA水平和蛋白水平表達(dá)情況。4.轉(zhuǎn)染AdYB.1的MCF.7細(xì)胞及BGC.823細(xì)胞,用Bcl一2的抑制劑HAl4.1預(yù)處理后再用As203誘導(dǎo),Western.blot方法檢測各組中蛋白LC3一II、p62和Beclinl的表達(dá),MDC染色觀察自噬泡的聚集。結(jié)果:1.轉(zhuǎn)染SiYB.1冪[1AdYB—l的MCF.7細(xì)胞及BGC.823細(xì)胞,YB.1

4、抑制三氧化二砷誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞自噬及其機(jī)制的研究經(jīng)Western-blot方法檢測,與無意干擾組(HK)和空病毒組(AdGFP)相比,兩細(xì)胞的SiYB.1組YB.1蛋白表達(dá)均明顯降低(P<0.05),AdYB.1組YB.1蛋白表達(dá)均明顯升高(P

5、比藍(lán)色熒光的強(qiáng)度明顯減弱。相反,轉(zhuǎn)染了SiⅦ.1的腫瘤細(xì)胞與對照組細(xì)胞相比,由As203誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬水平進(jìn)一步增強(qiáng),自噬標(biāo)記蛋白檢測示SiYB.1組促進(jìn)了As203誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)LC3.II蛋白的轉(zhuǎn)化,p62蛋白的降解也明顯增加,MDC染色可見自噬泡熒光強(qiáng)度增強(qiáng),熒光顆粒明顯增多。3.BGC.823細(xì)胞和MCF一7細(xì)胞各轉(zhuǎn)染組經(jīng)49M/L的As203誘導(dǎo)后,qRT-PCR檢測顯示,與轉(zhuǎn)染對照(AdGFP)組相比,AdYB.1組Bcl.2基因相對表達(dá)水平增高(P<0.05);而干擾YB.1表達(dá)后,SiYB.1

6、組Bcl.2基因相對表達(dá)水平較其轉(zhuǎn)染對照(HK)組明顯降低(P

7、的抑制齊WJHAl4.1預(yù)處理4h后再用As203誘導(dǎo),Western.blot檢測顯示,AdYB.1組Beclin1蛋白表達(dá)降低,P62蛋白降解減少,LC3.II蛋白減少,在加入HAl4.1組Beclin1蛋白恢復(fù)表達(dá),P62降解增加,LC3一II升高。提示在Bcl.2的抑N幫JHAl4.1預(yù)處理后,As203誘導(dǎo)的自噬不能因轉(zhuǎn)染AdYB.1而被抑制。江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)論:1.在BGC.823細(xì)胞和MCF一7細(xì)胞中成功轉(zhuǎn)染SiYB.1和AdYB·l改變YB—l的表達(dá)。2.YB.1能夠抑制As203誘導(dǎo)

8、的BGC一823細(xì)胞和MCF.7細(xì)胞的自噬水平。3.YB.1可能通過上調(diào)Bcl-2、抑制Beclinl,實(shí)現(xiàn)對As203誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞自噬的抑制作用,為YB.1參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的自噬提出了新的機(jī)制。關(guān)鍵詞:YB.1;Bcl.2;Beclin1;自噬;三氧化二砷YB.1抑制三氧化二砷誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞自噬及其機(jī)制的研究ABSTRACTObjectives:1.ToinvestigatetheexpressionofY-

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