yb-1抑制三氧化二砷誘導(dǎo)的腫瘤細胞自噬及其機制的研究

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1、江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文YB--1抑制三氧化二砷誘導(dǎo)的腫瘤細胞自噬及其機制的研究姓名：龍璐璐申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：許文林20120607江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要目的：1通過轉(zhuǎn)染SiRNA干擾人YB．1基因的質(zhì)粒(SiYB．1)和攜帶人YB．1基因的腺病毒表達載體pAdIEasy／YB．1(AdYB．1)，探討YB．1與小劑量三氧化二砷(As203)誘導(dǎo)的乳腺癌MCF．7細胞及胃癌BGC．823細胞自噬的關(guān)系。2．從自噬相關(guān)基因Beclin1和Bcl．2調(diào)控細胞自噬的機制著手在基因和蛋白水平初步

2、探討YB．1調(diào)控自噬的機制。方法：1．Western．blot方法檢測脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染SiRNA干擾YB．1和腺病毒轉(zhuǎn)染pAdlEasy／YB．1過表達YB．1的MCF．7細胞和BGC．823細胞中YB．1蛋白表達的變化。2．4I．tM／LAs203作用于轉(zhuǎn)染SiYB．1和AdYB．1的MCF．7細胞及BGC．823細胞，運用Western．blot的方法檢測各轉(zhuǎn)染組細胞中自噬標(biāo)記蛋白LC3．II和p62的表達，MDC自噬特異性染料熒光染色觀察自噬泡的聚集綜合評價YB．1對As203誘導(dǎo)的腫瘤細胞自噬的影響。3．

3、實時熒光定量PCR(qRT-PCR)和Western．blot的方法檢測自噬相關(guān)基因Beclin1和Bcl．2在MCF．7細胞及BGC．823細胞各轉(zhuǎn)染組中的mRNA水平和蛋白水平表達情況。4．轉(zhuǎn)染AdYB．1的MCF．7細胞及BGC．823細胞，用Bcl一2的抑制劑HAl4．1預(yù)處理后再用As203誘導(dǎo)，Western．blot方法檢測各組中蛋白LC3一II、p62和Beclinl的表達，MDC染色觀察自噬泡的聚集。結(jié)果：1．轉(zhuǎn)染SiYB．1冪[1AdYB—l的MCF．7細胞及BGC．823細胞，YB．1

4、抑制三氧化二砷誘導(dǎo)的腫瘤細胞自噬及其機制的研究經(jīng)Western-blot方法檢測，與無意干擾組(HK)和空病毒組(AdGFP)相比，兩細胞的SiYB．1組YB．1蛋白表達均明顯降低(P<0．05)，AdYB．1組YB．1蛋白表達均明顯升高(P

5、比藍色熒光的強度明顯減弱。相反，轉(zhuǎn)染了SiⅦ．1的腫瘤細胞與對照組細胞相比，由As203誘導(dǎo)的細胞自噬水平進一步增強，自噬標(biāo)記蛋白檢測示SiYB．1組促進了As203誘導(dǎo)的細胞內(nèi)LC3．II蛋白的轉(zhuǎn)化，p62蛋白的降解也明顯增加，MDC染色可見自噬泡熒光強度增強，熒光顆粒明顯增多。3．BGC．823細胞和MCF一7細胞各轉(zhuǎn)染組經(jīng)49M／L的As203誘導(dǎo)后，qRT-PCR檢測顯示，與轉(zhuǎn)染對照(AdGFP)組相比，AdYB．1組Bcl．2基因相對表達水平增高(P<0．05)；而干擾YB．1表達后，SiYB．1

6、組Bcl．2基因相對表達水平較其轉(zhuǎn)染對照(HK)組明顯降低(P

7、的抑制齊WJHAl4．1預(yù)處理4h后再用As203誘導(dǎo)，Western．blot檢測顯示，AdYB．1組Beclin1蛋白表達降低，P62蛋白降解減少，LC3．II蛋白減少，在加入HAl4．1組Beclin1蛋白恢復(fù)表達，P62降解增加，LC3一II升高。提示在Bcl．2的抑N幫JHAl4．1預(yù)處理后，As203誘導(dǎo)的自噬不能因轉(zhuǎn)染AdYB．1而被抑制。江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)論：1．在BGC．823細胞和MCF一7細胞中成功轉(zhuǎn)染SiYB．1和AdYB·l改變YB—l的表達。2．YB．1能夠抑制As203誘導(dǎo)

8、的BGC一823細胞和MCF．7細胞的自噬水平。3．YB．1可能通過上調(diào)Bcl-2、抑制Beclinl，實現(xiàn)對As203誘導(dǎo)的腫瘤細胞自噬的抑制作用，為YB．1參與調(diào)控腫瘤細胞的自噬提出了新的機制。關(guān)鍵詞：YB．1；Bcl．2；Beclin1；自噬；三氧化二砷YB．1抑制三氧化二砷誘導(dǎo)的腫瘤細胞自噬及其機制的研究ABSTRACTObjectives：1．ToinvestigatetheexpressionofY-