骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及對肺損傷修復(fù)的研究

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1、骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞增殖及對肺損傷修復(fù)的研究計(jì):學(xué)位論文:46頁表格:6個(gè)衣怡:b7r插圖:19幅王磊指導(dǎo)教師:聞慶平教授申請學(xué)位級別:碩士學(xué)位論文提交日期:2012年4月學(xué)位授予單位:大連醫(yī)科大學(xué)專業(yè)名稱:麻醉學(xué)論文答辯日期:2012年5月學(xué)位授予日期:2012年6月評閱人:答辯委員會主席:獨(dú)創(chuàng)性聲明\㈣本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得大連醫(yī)科大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了

2、明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名:簽字日期:遂!她年£月蓋日目錄一、摘要???????????????????????1(一)中文摘要???????????????????1(二)英文摘要???????????????????3二、正文??????????????????????5(一)前言?????????????????????5(二)第一部分BMSCs培養(yǎng)、鑒定及對增殖的影響材料和方法??????????????????6結(jié)果?????????????????????11(三)第二部分:增殖的BMSCs對ALI的治療作用材料和方法??????????????????16結(jié)果?

3、????????????????????19(四)討論?????????????????????24(五)結(jié)論?????????????????????29(六)參考文獻(xiàn)???????????????????30三、綜述???????????????????????34(一)綜述正文???????????????????34(二)參考文獻(xiàn)???????????????????4O四、致謝??????????????????????46骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及對肺損傷修復(fù)的研究碩士生姓名:指導(dǎo)教師:指導(dǎo)小組:專業(yè)名稱:王磊聞慶平教授麻醉學(xué)摘要目的:本研究以SD大鼠為動(dòng)物模型,研究大鼠BMSC

4、s體外分離培養(yǎng)、鑒定和增殖,評價(jià)不同濃度的LPS對BMSCs增殖能力的影響:并探討通過增殖的BMSCs對ALl修復(fù)的可行性。方法:1.原代BMSCs的分離培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化鑒定、流式細(xì)胞鑒定,并觀察不同代的BMSCs的生長狀況。給予不同濃度的LPS與BMSCs共培養(yǎng),利用MTT法判斷BMSCs增殖時(shí)LPS的最適濃度。2.隨機(jī)從28只雌性大鼠中取24只,經(jīng)腹腔注入O.5ml濃度為5mg/kg的LPS建立ALI,造模0.5h后,將其隨機(jī)分成3組:治療組A(8只,經(jīng)尾靜脈注入濃度為1x104/ml的BMSCs,體積為O.5m1),治療組B(8只,經(jīng)尾靜脈注入預(yù)先用濃度為0.0199/mlLPS共培

5、養(yǎng)的BMSCs1×104/ml,體積為O.5m1),損傷組(8只,經(jīng)尾靜脈注入0.5mlPBS),對照組(4只,經(jīng)尾靜脈注入等量的PBSlml)。24h后檢測各組大鼠的血?dú)庵笜?biāo)、肺濕干比、病理變化、及支氣管肺泡灌洗液中TNF.Q和IL.10的變化。結(jié)果:1.分離培養(yǎng)的BMSCs呈現(xiàn)長梭形,緊密排列似漩渦狀。經(jīng)誘導(dǎo)液誘導(dǎo)后,能分化成脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞。流式鑒定表面抗原CD29和CD90表達(dá)陽性,CD45和CDl1表達(dá)陰性,符合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞特性。MTT法顯示第3代和第5代相比第7代的BMSCs增殖較旺盛。濃度為0.01gg/ml的LPS對BMSCs增殖作用最顯著。2.成功造模24h后,損

6、傷組明顯出現(xiàn)低氧、二氧化碳潴留和酸中毒,肺濕干比值較正常高,病理切片示肺泡間隔斷裂增寬,組織疏松,并有炎性細(xì)胞侵潤。BALF中的TNF一0【較對照組明顯增高、IL.10較對照組明顯降低。治療組血?dú)夥治鲋笜?biāo)趨向正常,肺濕干比趨向正常,病理切片肺泡結(jié)構(gòu)相對均勻完整,肺泡間隔增寬不明顯,炎性細(xì)胞侵潤明顯減少,BALF中的TNF—Q較損傷組明顯降低、IL.10較損傷組明顯增高,而且治療組B比治療組A效果佳。結(jié)論:1.BMSCs經(jīng)誘導(dǎo)可分化成脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞。2.本實(shí)驗(yàn)用濃度為0.0199/ml的LPS刺激BMSCs后其增殖能力增強(qiáng)。3.本實(shí)驗(yàn)經(jīng)腹腔注入濃度5mg/kg的LPS可建立ALI模型。

7、4.注入增殖的BMSCs后可改善病理學(xué)變化,有助于促炎因子TNF-0【的降低和抗炎因子IL.10的增高。關(guān)鍵詞:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖脂多糖肺損傷2Studyontheproliferationofbonemarrow—derivedmesenchymalstemcellsandtheirtherapeuticeffectstolunginjuryMasterdegreecandidate:WangLeiSupervisor:Prof

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