牛膝多糖免疫調(diào)節(jié)作用及其機制的研究

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1、萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會主席：醫(yī)—皇墊拯——逝婆絲答辯委員會成員：工迭摳熬壑——差屋盛益逝塞握趔童態(tài)堂萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要?????????????????????????英文摘要????????????????????????．．3第一部分前言前言?????????????????????????一5第二部分材料及方法材料方法第三部分結(jié)果及分析討論914結(jié)果?????????????????????????????????．21分析討論?????????????????????一36，

2、J、結(jié)?????????????????????????????????．39參考文獻??????????』??．．：????????????40第四部分綜述綜述?????????????????????????????????．44綜述參考文獻???????????????????49英文縮略詞對照表?????????????????一54致謝????????????????????????????????????55附錄???????????????????????????56學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明???????????????

3、?57萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文牛膝多糖免疫調(diào)節(jié)作用及其機制的研究中文摘要目的牛膝多糖(Achyranthesbidentatapolysaccharides，ABPS)是從中藥牛膝中提取的一種水溶性小分子多糖化合物，具有提高機體免疫功能，抑制腫瘤生長，保肝，升高白細胞及緩解炎癥等多種生理活性。近年來，牛膝多糖在藥理研究和臨床應(yīng)用上備受關(guān)注。但有關(guān)牛膝多糖免疫活性的研究報道大多僅局限于其對免疫細胞的活化或增值作用，并沒有深入研究其作用機制。本文主要從細胞水平研究牛膝多糖對腹腔巨噬細胞(J774A)的免疫調(diào)節(jié)作用并探討其作用

4、機制及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，為牛膝多糖的進一步藥物研發(fā)提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。方法(1)采用光學(xué)顯微鏡觀察牛膝多糖對J774A細胞形態(tài)的影響。(2)采用激光共聚焦顯微鏡觀察ABPS對NF．r,B核轉(zhuǎn)位的影響。(3)采用ELISA法檢測ABPS對J774A細胞分泌炎性細胞因子(TNF．伐、IL．1p)的影響，及抗TLR4／TLR2／CDl4抗體和NF．rd3抑制劑對ABPS誘導(dǎo)J774A細胞釋放TNF．儀、IL．1D作用的影響。(4)采用RT-PCR檢測ABPS對J774A細胞n師．Q、IL．1p、TLR4、TLR2、MyD88、TRAM

5、、P．p38、p38MAPK等mRNA表達的影響。(5)采用WesternBlot檢測ABPS對J774A細胞核內(nèi)NF．r,B變化，及對細胞TLR4、TLR2、MyD88、TRAM、p-p38、p38MAPK表達的影響。結(jié)果(1)ABPS能夠使J774A細胞表面突觸明顯地增加且具有濃度依賴性。(2)ABPS能夠促進NF．r,B核轉(zhuǎn)位。(3)ABPS能顯著促進J774A細胞分泌炎性細胞因子TNF一伐及IL—lB，且具有濃度依賴性；NF．KB抑制劑(PDTC)fl皂夠顯著的抑制牛膝多糖刺激J774A細胞分泌細胞因子；抗TLR2抗體對

6、牛膝多糖刺激J774A細胞分泌細胞因子沒有明顯的抑制作用；抗TLR4抗體能夠較顯著地抑制牛膝多糖刺激J774A細胞分泌細胞因子。(4)ABPS能促進TNF．c【、IL．1pmRNA的表達，且具有濃度依賴性；能促進TLR4mRNA的表達，而對TLR2mRNA的表達沒有明顯差異；能顯著的提高MyD88基因的表達，但TRAMmRNA的表達沒有顯著變化。萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文(5)細胞核內(nèi)蛋白NF．v,B隨ABPS給藥組濃度的增高而增高；ABPS給藥組與對照組比較TLR4的表達顯著增高，而TLR2的表達沒有明顯差異，MyD88

7、表達明顯升高，而TRAM的表達沒有明顯差異。結(jié)論ABPS能促進J774A細胞分泌炎性細胞因子耵師．(It及IL．1p且具有濃度依賴性，同時NF．rd3抑制劑PDTC及抗TLR4抗體能顯著抑制ABPS刺激TNF．c【及IL．113的分泌；ABPS能促進NF．r．J3核轉(zhuǎn)位；ABPS能夠促進MyD88的表達，而TRAM的表達沒有明顯差異。綜上所述，ABPS可能通過TLRs(TLR4)信號通路的MyD88依賴性途徑介導(dǎo)其免疫調(diào)節(jié)作用。關(guān)鍵詞牛膝多糖；Toll樣受體；信號通路；NF-r,B2萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文Immunom

8、odulatoryEffectsandMechanismofPolysaccharidefromAchyranthesbidentatapolysaccharidesObjectiveAchyranthesbidentata—charideswasextract