牛膝多糖免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制的研究

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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會(huì)主席：醫(yī)—皇墊拯——逝婆絲答辯委員會(huì)成員：工迭摳熬壑——差屋盛益逝塞握趔童態(tài)堂萬(wàn)方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要?????????????????????????英文摘要????????????????????????．．3第一部分前言前言?????????????????????????一5第二部分材料及方法材料方法第三部分結(jié)果及分析討論914結(jié)果?????????????????????????????????．21分析討論?????????????????????一36，

2、J、結(jié)?????????????????????????????????．39參考文獻(xiàn)??????????』??．．：????????????40第四部分綜述綜述?????????????????????????????????．44綜述參考文獻(xiàn)???????????????????49英文縮略詞對(duì)照表?????????????????一54致謝????????????????????????????????????55附錄???????????????????????????56學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明???????????????

3、?57萬(wàn)方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文牛膝多糖免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制的研究中文摘要目的牛膝多糖(Achyranthesbidentatapolysaccharides，ABPS)是從中藥牛膝中提取的一種水溶性小分子多糖化合物，具有提高機(jī)體免疫功能，抑制腫瘤生長(zhǎng)，保肝，升高白細(xì)胞及緩解炎癥等多種生理活性。近年來(lái)，牛膝多糖在藥理研究和臨床應(yīng)用上備受關(guān)注。但有關(guān)牛膝多糖免疫活性的研究報(bào)道大多僅局限于其對(duì)免疫細(xì)胞的活化或增值作用，并沒(méi)有深入研究其作用機(jī)制。本文主要從細(xì)胞水平研究牛膝多糖對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞(J774A)的免疫調(diào)節(jié)作用并探討其作用

4、機(jī)制及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，為牛膝多糖的進(jìn)一步藥物研發(fā)提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法(1)采用光學(xué)顯微鏡觀察牛膝多糖對(duì)J774A細(xì)胞形態(tài)的影響。(2)采用激光共聚焦顯微鏡觀察ABPS對(duì)NF．r,B核轉(zhuǎn)位的影響。(3)采用ELISA法檢測(cè)ABPS對(duì)J774A細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子(TNF．伐、IL．1p)的影響，及抗TLR4／TLR2／CDl4抗體和NF．rd3抑制劑對(duì)ABPS誘導(dǎo)J774A細(xì)胞釋放TNF．儀、IL．1D作用的影響。(4)采用RT-PCR檢測(cè)ABPS對(duì)J774A細(xì)胞n師．Q、IL．1p、TLR4、TLR2、MyD88、TRAM

5、、P．p38、p38MAPK等mRNA表達(dá)的影響。(5)采用WesternBlot檢測(cè)ABPS對(duì)J774A細(xì)胞核內(nèi)NF．r,B變化，及對(duì)細(xì)胞TLR4、TLR2、MyD88、TRAM、p-p38、p38MAPK表達(dá)的影響。結(jié)果(1)ABPS能夠使J774A細(xì)胞表面突觸明顯地增加且具有濃度依賴性。(2)ABPS能夠促進(jìn)NF．r,B核轉(zhuǎn)位。(3)ABPS能顯著促進(jìn)J774A細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子TNF一伐及IL—lB，且具有濃度依賴性；NF．KB抑制劑(PDTC)fl皂夠顯著的抑制牛膝多糖刺激J774A細(xì)胞分泌細(xì)胞因子；抗TLR2抗體對(duì)

6、牛膝多糖刺激J774A細(xì)胞分泌細(xì)胞因子沒(méi)有明顯的抑制作用；抗TLR4抗體能夠較顯著地抑制牛膝多糖刺激J774A細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。(4)ABPS能促進(jìn)TNF．c【、IL．1pmRNA的表達(dá)，且具有濃度依賴性；能促進(jìn)TLR4mRNA的表達(dá)，而對(duì)TLR2mRNA的表達(dá)沒(méi)有明顯差異；能顯著的提高M(jìn)yD88基因的表達(dá)，但TRAMmRNA的表達(dá)沒(méi)有顯著變化。萬(wàn)方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文(5)細(xì)胞核內(nèi)蛋白NF．v,B隨ABPS給藥組濃度的增高而增高；ABPS給藥組與對(duì)照組比較TLR4的表達(dá)顯著增高，而TLR2的表達(dá)沒(méi)有明顯差異，MyD88

7、表達(dá)明顯升高，而TRAM的表達(dá)沒(méi)有明顯差異。結(jié)論ABPS能促進(jìn)J774A細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子耵師．(It及IL．1p且具有濃度依賴性，同時(shí)NF．rd3抑制劑PDTC及抗TLR4抗體能顯著抑制ABPS刺激TNF．c【及IL．113的分泌；ABPS能促進(jìn)NF．r．J3核轉(zhuǎn)位；ABPS能夠促進(jìn)MyD88的表達(dá)，而TRAM的表達(dá)沒(méi)有明顯差異。綜上所述，ABPS可能通過(guò)TLRs(TLR4)信號(hào)通路的MyD88依賴性途徑介導(dǎo)其免疫調(diào)節(jié)作用。關(guān)鍵詞牛膝多糖；Toll樣受體；信號(hào)通路；NF-r,B2萬(wàn)方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文Immunom

8、odulatoryEffectsandMechanismofPolysaccharidefromAchyranthesbidentatapolysaccharidesObjectiveAchyranthesbidentata—charideswasextract