基于甘露糖受體的黑靈芝多糖免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究

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1、分類(lèi)號(hào)：密級(jí)：公開(kāi)UDC：學(xué)號(hào)：405605112088南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文基于甘露糖受體的黑靈芝多糖免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究StudyonimmunomodulatoryeffectsandmechanismsofapolysaccharidefromGanodermaatrumbasedonmannosereceptor（國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目：31201326）帥小雪培養(yǎng)單位（院、系）：食品學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：謝明勇教授申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門(mén)類(lèi)：理學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)論文答辯日期：2015年5月31日答辯委員會(huì)主席：評(píng)閱人：2015年5

2、月31日一、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研宄工作及取得的研宄成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得南昌大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名（手寫(xiě)）：忡Khf簽字日期：淡工年艾月引曰二、學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借

3、閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)北京萬(wàn)方數(shù)據(jù)股份有限公司和中國(guó)學(xué)術(shù)期刊（光盤(pán)版）電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》和《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》中全文發(fā)表，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù),p意按“章程”規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。學(xué)位論文作者簽名（手寫(xiě)）：怍小蜃導(dǎo)師簽名（手寫(xiě)簽字日期：年r月引日簽字日期年（論文題目甘f癩旻飾胡f躉t務(wù)嫡吏褒譎辛作用丨各脈糸丨砷資姓名iM-thf學(xué)號(hào)論文級(jí)別博士□碩士s/院/系/所專業(yè)公開(kāi)□保密（向校學(xué)

4、位辦申請(qǐng)獲批準(zhǔn)為“保密”，年月后公幵)摘要摘要多糖被證實(shí)具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗腫瘤、降血糖、降血脂等多種功能，其中免疫調(diào)節(jié)作用是眾多多糖類(lèi)物質(zhì)的最基本的作用，該調(diào)節(jié)方式主要通過(guò)以下幾個(gè)途徑實(shí)現(xiàn)：直接或間接激活巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞和T、B淋巴細(xì)胞；促進(jìn)細(xì)胞因子的生成與分泌；激活補(bǔ)體系統(tǒng)；促進(jìn)抗體產(chǎn)生等。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，多糖激活免疫細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用主要是通過(guò)與細(xì)胞表面的受體相結(jié)合而介導(dǎo)的。目前發(fā)現(xiàn)的受體主要包括Toll樣受體（TLRs）、甘露糖受體（MR）、樹(shù)突狀細(xì)胞相關(guān)C型凝集素-1（Dectin-1）、補(bǔ)體受體3（CR3）、清道夫受體（SR）等。多糖與這些

5、受體結(jié)合后可以激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，進(jìn)而活化免疫細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞因子的釋放調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。MR可識(shí)別含甘露糖或巖藻糖殘基的多種糖分子，是先天免疫系統(tǒng)中重要的模式識(shí)別受體和內(nèi)吞受體，主要存在于巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞的細(xì)胞膜表面，在維持內(nèi)穩(wěn)態(tài)、識(shí)別病原體、誘導(dǎo)細(xì)胞因子、抗原遞呈等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。TLRs則是目前所發(fā)現(xiàn)的受體中與多糖關(guān)系最為密切的一類(lèi)。黑靈芝既是我國(guó)傳統(tǒng)的藥用真菌也是民間常見(jiàn)的食品配料，它具有多方面的生物活性。本實(shí)驗(yàn)室從黑靈芝中分離純化出一種水溶性多糖（PSG-1），綜合現(xiàn)代化學(xué)分析方法，解析出了其結(jié)構(gòu)特征，結(jié)果表明PSG-1的單糖組成為甘露糖、半乳糖

6、和葡萄糖，摩爾比為1：1.28：4.91。實(shí)驗(yàn)室前期研究已確定PSG-1具有增強(qiáng)宿主免疫功能的作用，在此基礎(chǔ)上開(kāi)展MR的研究對(duì)深入了解PSG-1活性功能與免疫機(jī)制，以及基于MR為靶向的黑靈芝的深度開(kāi)發(fā)具有重要意義。因此，本實(shí)驗(yàn)探討了PSG-1的免疫調(diào)節(jié)作用與MR的關(guān)系以及在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中PSG-1激活的TLRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與MR的關(guān)系。主要研究?jī)?nèi)容如下：1、PSG-1對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞MR的影響：為了探討PSG-1對(duì)正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞MR的影響，本實(shí)驗(yàn)將20～160μg/mLPSG-1作用巨噬細(xì)胞后，用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞表面MR的表達(dá)，RT-PCR

7、檢測(cè)巨噬細(xì)胞MR的mRNA表達(dá)水平；以MR抑制劑甘露聚糖預(yù)處理細(xì)胞30min后加入PSG-1，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，酶聯(lián)免疫法測(cè)定培養(yǎng)上清液中腫瘤壞死因子-α、白細(xì)I摘要胞介素-1β的含量，RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞TNF-α、IL-1β的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果顯示PSG-1可上調(diào)巨噬細(xì)胞表面MR的表達(dá)及MRmRNA水平；與單獨(dú)PSG-1處理組相比，甘露聚糖預(yù)處理可明顯抑制PSG-1增強(qiáng)的巨噬細(xì)胞吞噬功能和誘導(dǎo)細(xì)胞分泌IL-1β，對(duì)TNF-α的分泌則無(wú)影響。結(jié)論：MR能部分介導(dǎo)PSG-1對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用。2、PSG-1對(duì)LPS刺激的小

8、鼠腹腔巨噬細(xì)胞MR的影響：為了探討PSG-1對(duì)LPS