煙草抗馬鈴薯y病毒mirna的篩選及相關(guān)mirna的功能分析

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1、分類號＾密級公巧ＵＤＣＷ２全曰制碩±專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文煙草抗馬鈴馨Ｙ病毒ｍｉＲＮＡ的篩選及相關(guān)ｍ瓜ＮＡ的功能分析作者姓名；詹琳琳指導(dǎo)教師：武曉云副教授郭玉雙副妍究員專業(yè)學(xué)位名稱：農(nóng)業(yè)推廣碩壬領(lǐng)域名稱：植物保護植物病蟲害綜合防治研究方向：農(nóng)業(yè)與食品科學(xué)學(xué)院、所在學(xué)院；動物科巧學(xué)院（籌）論文提交日期：２０１５年１２月２１日■，浙江農(nóng)林大學(xué)－２０１５年１２月ｒ．■？．ＺｈｅｉａｎｇＡ狂ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｙＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅ

2、ｒ繼ＳｃｒｅｅｎｉｎｆｏｒｍｉＲＮＡｏｆｔｏｂａｃｃｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｏｔａｔｏｖｉｒｕｓＹｇｐａｎｄａｎｄｆｕ田ｃｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｅｌｅｖａｎｔｍｉＲＮＡ－Ｃａｎｄｉｄａｔｅ：ＺｈａｎｇＬｉｎｌｉｎＡｄｖ－ｉｓｅｒ：ＷｕＸｉａｏｕｎＡｓｓｏｃｉａｔｅＰｒｏｆｅｓｓｏｒｙ，ｕ－Ａｓｓｏｃｉａ化Ｓｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＧｕｏＹｕｓｈｕａ田ｇＡｓｓｏｃｉａｔｅＲｅｓｅａｒｃｈｅｒ，Ｓｅｃｉａｌｉｔ：ＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｐｙＤａｔｅｏｆＳｕｂｍｉｓｓｉｏｎ：Ｄｅｃｅｍ

3、ｂｅｒ２１２０１５，Ｚｈｅｉａｎｇ乂＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｙ＾ＬｉｎａｎＺｈｅｉａｎｒｏｖｉｎｃｅＰ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ，ｊｇｐ，獨創(chuàng)巧聲明＂本人聲明，所呈交的學(xué)位論文，是受煙草抗馬鈴著Ｙ病毒相關(guān)ｍｉＲＮＡ的篩選與功能分＂析項目資助，在指導(dǎo)教師指導(dǎo)下，通過我的努為取得的成果，并且是自己撰寫的。盡我所知，除了文中作了標注和致謝中己經(jīng)作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研巧成一果，也不包含在浙江農(nóng)林大學(xué)或其他教育機構(gòu)獲得學(xué)位或證書而使用過的材料。與我同對本研巧做出貢獻的同志，都在論文中作了明確的說明并表示了謝意。如被查有嚴重侵犯他

4、人知識產(chǎn)權(quán)的仔為，由本人承擔(dān)應(yīng)有的責(zé)任。學(xué)位論文作者親筆簽名；２０１５．１２．２１：日期論文使用授權(quán)的說明本人完全了解浙江農(nóng)林大學(xué)有關(guān)保留，，、使用學(xué)位論文的規(guī)定即學(xué)校有權(quán)送交論文的復(fù)巧件，可Ｗ采用影印允許論文被查閱和借閱：學(xué)?？桑颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。，在保密＿年后解密可適用本授權(quán)書。□＿不保密，本學(xué)位論文屬于不保密。口＂＂（請在方框內(nèi)巧Ｖ）學(xué)位論文作者親筆簽名：：２０１５．１２．２１＿日期２０１５．１２．２１：日期：指導(dǎo)教師親筆簽名＿ｍ摘要一（ＰＶＹ），煙草是我國重要的經(jīng)濟

5、作物，馬鈴墓Ｙ病毒是煙草上的主要病害之近幾年，，ＰＶＹ在我國煙草主要產(chǎn)區(qū)爆發(fā)成災(zāi)并且存在逐年加重的趨勢。目前生產(chǎn)上對于ＰＶＹ的防治尚無有效的藥劑，因此，培育抗ＰＶＹ的煙草品種是防治該病害一最為有效的辦法，了解病毒與煙草相互作用的分子機理是解決迄。然而問題的關(guān)鍵。研巧表明，ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉＲＮＡ在調(diào)節(jié)植物對病毒的抗性方面具有重要作用，本文（）在探究ＰＶＹ侵染對植物內(nèi)源ｍｉＲＮＡ表達的變化的基礎(chǔ)上，探索是否可通過調(diào)控內(nèi)源ｍ一ｉＲＮＡ基因的表達從而起到抗病毒作用，為煙草的病毒防治和抗病育種提供個新的思路。本研究獲得的主要研究結(jié)果如下：１ＰＶＹＲＮＡ（ｓｍ

6、ａｌｌＲＮＡ，ｓＲＮＡ），．對侵染煙草樣品及健康對照進行了小測序通過分析ＰＶＹ侵染后煙草內(nèi)源ｍｉＲＮＡ表達譜的變化，表明ＰＶＹ能夠顯著影響煙草內(nèi)源８１個ｍｉＲＮＡ表達發(fā)生變化，其中上調(diào)表達ｍｉＲＮＡ５７個，下調(diào)表達２１ｉ個，對表達差異的ｍＲＮＡ進行鞭基因預(yù)測。－ｍ－９６ｂ－－２．選擇表達蟲著上調(diào)的煙草ｎｔａｉＲ１５６ｇ、ｎｔａｔｎｉＲ３、ｎｔａｍ化１６９ａ、打ｔａｍｉＲ６１４９ａ，－ｍ化６０１－－ｍ化顯著下調(diào)的ｎｔａ９ａＷ及表達差異不顯著的ｎｔａｍｉＲ１６８ａ、ｎｔａ１７２ｃ進行Ｎ一ｏｒｔｈｅｒｎ印跡雜交驗證與測序及差異分析結(jié)果基本，雜交結(jié)果致。－

7、３ｔ３９ｔ－．篩選出ｎａｍｉＲ化作為本文的研巧對象，構(gòu)建了ｎａｍ化３９化基因超量表達的－植物表達載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化，將ｎｔａｎｉｉＲ３９化轉(zhuǎn)入煙草栽培品種＂＂Ｋ３２６中，獲得了轉(zhuǎn)基因植株。將轉(zhuǎn)基因植株自交至Ｔ２代，用于后期研究。４．對Ｔ２代轉(zhuǎn)基因煙草未轉(zhuǎn)基因植株作為對照進行ＰＶＹ的抗病性鑒定，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因煙草的發(fā)病延緩，癥狀較未轉(zhuǎn)基因煙草明顯減弱，證實煙草ｍｉＲ３９化具有抗ＰＶＹ侵染的功能。本研巧從ｍｉＲＮＡ的角度尋找ＰＶＹ的