腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對人脂肪干細(xì)胞增殖與成骨分化的作用

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1、京誠如替聲從碩±研究生學(xué)位論義纖北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院研究生院學(xué)校代碼：１００２３學(xué)號：Ｓ２０１２００４０２２碩±學(xué)位論文（專業(yè)學(xué)位）腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對人脂肪干細(xì)胞增殖與成骨分化的作用ＴｈｅＥｆｆｅｃｔｏｆＢｒａ－ｉ打ｄｅｒｉｖｅｄＮｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃＦａｃｔｏｒｏｎｔｈｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅＯｓｔｅｏｇｅｎｉｃＤ－ｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＨｕｍａｎＡｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄＳｔｅｍＣｅｌｌｓ所院：整形外科醫(yī)院姓

2、名：吳小堇指導(dǎo)教師：楊斌教授導(dǎo)師小組：張智勇教授唐曉軍副教授學(xué)科專業(yè)：外科學(xué)研究方向：整形外科完成日期：２０１５年３月目錄中１：摘要英文摘要２－前胃４一第章人脂肪干細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)與生物學(xué)特性檢測６１．Ｓ的６２．實(shí)驗(yàn)材料６３．實(shí)驗(yàn)方法８４．結(jié)果１１５．１２職６．小結(jié)１３第二章腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對人脂肪干細(xì)胞増殖與成骨分化的作用１４１．目的１４２．實(shí)驗(yàn)材料１４３．實(shí)驗(yàn)方法１６４．Ｓ２０

3、果５．ｉ寸論２１６．小結(jié)２２全文總結(jié)２３—論文參考文獻(xiàn)２４綜述腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子與骨／牙組織發(fā)育代謝２９綜述參考文獻(xiàn)３６附錄１全文圖片４１附錄２縮寫注釋４５致謝４６原創(chuàng)性聲明４７腦源巧神經(jīng)營養(yǎng)因子對人脂肪干細(xì)胞増殖與成骨分化的作用摘要目的ｘ＂１．了解ＢＤＮＦ高親和性受體ＴｒｋＢ與低親和性受體ｐ７５于ｈＡＳＣｓ表達(dá)情況。２．明確不同濃度的ＢＤＮＦ對ｈＡＳＣｓ增殖及細(xì)胞周期相關(guān)基因影響。３．分析不同濃度的ＢＤＮＦ對ｈＡＳＣｓＡＬＰ活性及

4、成骨分化相關(guān)基因影響，探討ＢＤＮＦ＞在ｈＡＳＣｓ成晉分化過程中的作用。方法１．膠原酶消化分離ｈＡＳＣｓ，貼壁培養(yǎng)并傳代純化。對ｈＡＳＣｓ進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測，，誘導(dǎo)成脂、成骨分化并進(jìn)行染色，Ｗ對間充質(zhì)干細(xì)胞特性進(jìn)行鑒定。？２．＞陸受體與７５ＳＣｓ＾１免疫巧光雙染法檢測化ｐ受體于ｈＡ表達(dá)情況。３．Ｗ含不同濃度ＢＤＮＦ的無血清培養(yǎng)基培育ｈＡＳＣｓ，分別于１２ｈ、２４ｈ、４如ＷＭＴＴ法檢測ｈＡＳＣｓ增殖能力變化，并于４８ｈ時收集細(xì)胞，ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ檢測心－６７表達(dá)水平。４．Ｗ含不同

5、濃度ＢＤＮＦ的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基培育ｈＡＳＣｓ，于成骨誘導(dǎo)１４ｄ時檢測ｈＡＳＣｓ的ＡＬＰ活性變化，并于成骨誘導(dǎo)３ｄ、１４ｄ時收集細(xì)胞，ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ檢測成骨標(biāo)志基因化么心Ａ併Ｗ表達(dá)水平。結(jié)果１．ｈＡＳＣｓ表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志，不表達(dá)造血干細(xì)胞表面標(biāo)志，在體外經(jīng)誘導(dǎo)可向成脂、成骨方向分化。？２．ＳＣｓ表達(dá)Ｔｒ誠受體檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ｍ，但未見明顯ｐ７５受體表達(dá)。－－３．ＢＤＮＦ可ｈＡＳＣｓ增殖促進(jìn)，上調(diào)ＣＣ、知６７表達(dá)，具有濃度依賴性戶＜鮮（０．０巧。４．隨ＢＤＮＦ濃ＡＬＰ活性呈ｌＯ

6、Ｏｎｍｌ姐戶度増高，下降趨勢，Ｗｇ／抑制效果最顯著（＜０．０５）。７ｄ時ｄ，／？伽Ｘ么心戶、成骨，心戶隨濃度增加出現(xiàn)下降庭勢成骨１４時；餅Ｗ均隨處理濃度増加出現(xiàn)下降．，于ｌＯＯｎｇ／ｍｌ組下降最顯著（戸＜００５）。結(jié)論采用酶消法與貼壁篩選法純化細(xì)胞可有效分離ｈＡＳＣｓ；高濃度ＢＤＮＦ可促進(jìn)ｈＡＳＣｓ增殖但抑制其向成骨分化。ＷＢ關(guān)鍵詞：人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞；腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子；成骨分化；化陸受體；Ｐ７５受體１ＴｈｅＥｆｆｅｃｔｏｆＢｒａｎ－ｄｅｒｉｉｖｅｄＮｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ

7、ＦａｃｔｏｒｏｎｔｈｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅＯｓｔｅｏｇｅｎｉｃＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＨｕｍａｎ－ＡｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄＳｔｅｍＣｅｌｌｓＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｅｃｔｉｖｅｊ們８１．Ｔｏｉ打ｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴｒｋＢｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｄｐ７５ｒｅｃｅｔｏｒｉｎｐｈＡＳＣｓ．２．ＴｏｄｅｆｉｎｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＢＤＮＦｏ打ｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈＡＳＣｓ

8、ａ打ｄｏｎ—－ｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅｒｅｌａｔｅｄ呂ｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏ打ｏｆｈＡＳＣｓ．３．ＴｏｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅｉｍｐａｃｔｏｆＢＤＮＦ０打ｔｈｅＡＬＰａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｈＡＳＣｓａｎｄｏｎｂｏｎｅ—ｒｅ