鴨甲肝病毒1和3型一步法雙重rt-pcr檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用

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4、它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料一。與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。＇研究生簽名：心合年＾月／巧關(guān)于論文使用授巧的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，目Ｐ：學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可レッ采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可Ｗ用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。Ｉ／本論文不保密。□本論文俱密，在年解密后適用本Ｉ＿

5、＿授權(quán)。＂＂（請(qǐng)?jiān)谏稀鮾?nèi)劃Ｖ）研巧；生簽名：廣年月／Ｔ曰Ｊ導(dǎo)師簽名：Ｉｔ而ｔｅ（巧６月（ｒ日ｃＰｏ四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩±學(xué)位論文中文摘要一鴨病毒性肝炎（ＤＶＨ）是錐鴨的種急性傳染性病，主要侵害４周齡Ｗ內(nèi)的維鴨。該病由至少Ｈ種不同的病原引起，包括鴨甲肝病毒（ＤＨＡＶ）、１型鴨星狀病毒－－２（ＤａｓｔＶ１）和２型鴨星狀病毒（ＤａｓｔＶ）。分布范圍最廣的ＤＨＡＶ屬于?。遥危敛《荆崳姡魄莞尾《緦?。基于中和試驗(yàn)和系統(tǒng)發(fā)育分析，ＤＨＡＶ已被分為Ｈ種基因型（ＤＨＡＶ１、－－－－２和ＤＨＡＶ３）ＤＨＡＶＤＨＡＶ。其中

6、，１分布范圍最廣泛，ＤＨＡＶ２僅在臺(tái)灣發(fā)現(xiàn)報(bào)道，ＨＡＶ－３已Ｖ－而近幾年Ｄ經(jīng)給我國大陸地區(qū)和韓國的養(yǎng)鴨業(yè)造成嚴(yán)重危害。ＤＨＡ１與－－－ＤＨＡＶ３之間交叉保護(hù)作用不明顯ＤＨＡＶ２之間無交叉中和反應(yīng)，ＤＨＡＶ１和。通過對(duì)錐鴨的臨床癥狀和剖檢病變可１＾＾刀步對(duì)ＤＶＨ進(jìn)行診斷，但是該方法不能夠區(qū)分－－ＤＨＡＶ３ＤＨＡＶ１和。目前血清學(xué)診斷技術(shù)和分子生物學(xué)診斷技術(shù)已經(jīng)用ＤＨＡＶ的檢測(cè)和診斷，血清學(xué)診斷技術(shù)主要包括中和試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和免疫巧光抗體技術(shù)等，但是由于其繁瑣耗時(shí)和成本高，不能用于快速診斷。分子生物學(xué)

7、診－－ＰＣＲ和ＲＴＬＡＭＰ方法等斷技術(shù)包括ＲＴ，能夠快速特異地對(duì)ＤＨＡＶ分離株和臨床樣一一ＡＶ－ＡＶ－品進(jìn)行診斷，因此建立種能夠快速鑒別診斷ＤＨ１和ＤＨ３的步法雙重ＲＴ－ＰＣＲ方法對(duì)ＤＶＨ的防治我國有積極的作用。一ＲＴ－－－１．建立步法雙重ＰＣＲ方法用于檢測(cè)ＤＨＡＶ１和ＤＨＡＶ３－－ＤＨＡＶ－ｅｎ為了能夠快速鑒別診斷１和ＤＨＡＶ３，本研究根據(jù)ＧＢａｎｋ中ＤＨＡＶ１－－ＡＶ３ＡＶ－ＡＶ２和ＤＨ的全基因組序列，在ＤＨ１和ＤＨ３的基因保守區(qū)域分別設(shè)計(jì)了一－－Ｖ－對(duì)特異性引物ＰＣＲ方法鑒別診斷ＤＨＡＶ１３。，并成

8、功建立步法雙重ＲＴ和ＤＨＡ一－－－ＰＣ民方法能夠分別針對(duì)ＤＨＡＶＤＨＡＶ３９９２ｂ該步法雙重ＲＴ１和特異性地?cái)U(kuò)增出ｐ和１５３３ｂｐ的目的片段，而對(duì)健康維鴨肝臟組織、番鴨細(xì)小病毒、鴨癌病毒、