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1、分類號(hào)：Q936單位代碼：10193密級(jí)：公開學(xué)號(hào)：2012197碩士學(xué)位論文有機(jī)磷降解菌生物學(xué)特性及降解酶酶學(xué)性質(zhì)分析Biologicalcharacteristicsoforganophosphatedegradingbacteriaandenzymologypropertiesanalysisoforganophosphatedegradationenzyme作者姓名：于亭學(xué)位類別：理學(xué)碩士專業(yè)名稱：生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向：生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能指導(dǎo)教師：楊美英副教授所在學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)院2015年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文
2、是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。盡我所知，除文中特別加以標(biāo)注和致謝所列內(nèi)容外，論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。本學(xué)位論文所有內(nèi)容若有不實(shí)之處，本人愿意承擔(dān)一切相關(guān)法律責(zé)任和后果。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明1、本人完全了解吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學(xué)位期間所完成的論文及相關(guān)成果的知識(shí)產(chǎn)權(quán)屬吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)所有，并
3、同意將本論文的版權(quán)授權(quán)給吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。2、本人（同意/不同意，務(wù)必打印后填寫）吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)將本論文版權(quán)授權(quán)給不同媒體進(jìn)行電子出版、多媒體出版、網(wǎng)絡(luò)出版以及其他形式出版（涉密學(xué)位論文解密后應(yīng)遵守此協(xié)議）。3、本人聲明畢業(yè)后若發(fā)表在攻讀研究生學(xué)位期間完成的論文及相關(guān)的學(xué)術(shù)成果，必須以吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)作為第一署名單位。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日指導(dǎo)教師簽名：簽字日期：年月日摘要磷是植物生長發(fā)育過程中不可或缺的元素，但在田間多以無效的結(jié)合態(tài)的磷存在
4、。土壤中的微生物不僅能夠?qū)o效態(tài)的磷轉(zhuǎn)化為游離態(tài)的有效磷，還可以降解田間殘留的農(nóng)藥。分離土壤中的解磷菌并加以利用，便可以充分利用土壤中的難溶性磷，創(chuàng)造更大的收益和經(jīng)濟(jì)效益。本實(shí)驗(yàn)從大豆根際土壤中分離純化出了三種既能降解大豆卵磷脂又能降解樂果的有機(jī)磷降解菌Yj1、Yj2和Yj3，并對(duì)這三種菌進(jìn)行了鑒定、生長條件優(yōu)化、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和有機(jī)磷降解酶的酶活性測定以及有機(jī)磷降解酶的分離純化。通過對(duì)有機(jī)磷降解菌生物學(xué)特性及有機(jī)磷降解酶酶學(xué)性質(zhì)的研究，一方面可以提高自然界中磷素利用率、減少有機(jī)磷農(nóng)藥在環(huán)境中的殘留，同時(shí)為提高有機(jī)磷降解率提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。另一方
5、面，也為降解有機(jī)農(nóng)藥和生產(chǎn)有機(jī)磷降解菌劑奠定基礎(chǔ)。經(jīng)vitek2自動(dòng)分析系統(tǒng)鑒定，Yj1為靈桿菌同粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratiamarcescens）且與SerratiamarcescensWW4（CP003959.1）的16srDNA相似度為99%。正交試驗(yàn)對(duì)所需培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，得到該菌株的最佳生長條件為甘露糖、蛋白胨和pH=8的組合。Yj1菌株在兩種磷源條件下，菌株生長量均很低，但72h內(nèi)以大豆卵磷脂為磷源時(shí)的菌體生長情況優(yōu)于樂果。以大豆卵磷脂為磷源時(shí)酸性磷酸酶、堿性磷酸酶與有機(jī)磷降解酶活性明顯高于以樂果為磷源時(shí)的酶活，且72h內(nèi)堿性磷酸酶活性一直都
6、高于酸性磷酸酶和有機(jī)磷降解酶。硫酸銨沉淀法結(jié)合陽離子交換層析成功從Yj1菌體中分離純化了有機(jī)磷降解酶，SDS-PAGE結(jié)果顯示純化的蛋白為單一條帶。且陽離子交換層析的提純倍數(shù)是硫酸氨沉淀的5.303倍，硫酸氨沉淀為粗酶的1.416倍。Yj2鑒定為醋酸鈣不動(dòng)桿菌，與Acinetobactergenomosp.13（FJ694759.1）的16srDNA相似度為99%。正交試驗(yàn)對(duì)所需培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，得到該菌株的最佳生長條件為葡萄糖、硫酸銨和pH=8的組合。Yj2菌株在兩種磷源條件下，72h內(nèi)以樂果為磷源時(shí)的菌體生長情況優(yōu)于大豆卵磷脂。以大豆卵磷脂為磷源時(shí)酸性
7、磷酸酶、堿性磷酸酶活性高于以樂果為磷源時(shí)的酶活，而有機(jī)磷降解酶活性卻是以樂果為磷源時(shí)高于大豆卵磷脂。且72h內(nèi)酸性磷酸酶活性一直都高于堿性磷酸酶和有機(jī)磷降解酶。硫酸銨沉淀法結(jié)合陽離子交換層析成功從Yj2菌體中分離純化了有機(jī)磷降解酶，SDS-PAGE結(jié)果顯示純化的蛋白為單一條帶。且陽離子交換層析的提純倍數(shù)是硫酸氨沉淀的10.44倍，硫酸氨沉淀為粗酶的1.327倍。Yj3鑒定為芽孢桿菌（Bacillus），與Bacillussp.B2101（JX266369.1）的16srDNA相似度為99%。正交試驗(yàn)對(duì)所需培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，得到該菌株的最佳生長條件為葡萄糖、
8、蛋白胨和pH=9的組合。Yj3菌株在兩種磷源條件下，72h內(nèi)以大豆卵磷脂為磷源時(shí)
