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《有機磷降解菌生物學特性及降解酶酶學性質分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、分類號：Q936單位代碼：10193密級：公開學號：2012197碩士學位論文有機磷降解菌生物學特性及降解酶酶學性質分析Biologicalcharacteristicsoforganophosphatedegradingbacteriaandenzymologypropertiesanalysisoforganophosphatedegradationenzyme作者姓名：于亭學位類別：理學碩士專業(yè)名稱：生物化學與分子生物學研究方向：生物大分子的結構與功能指導教師：楊美英副教授所在學院：生命科學學院2015年5月獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文
2、是本人在導師指導下，獨立進行研究所取得的成果。盡我所知，除文中特別加以標注和致謝所列內容外，論文中不包含其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得吉林農業(yè)大學或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。本學位論文所有內容若有不實之處，本人愿意承擔一切相關法律責任和后果。學位論文作者簽名：簽字日期：年月日關于學位論文使用授權的聲明1、本人完全了解吉林農業(yè)大學有關保留和使用學位論文的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學位期間所完成的論文及相關成果的知識產權屬吉林農業(yè)大學所有，并
3、同意將本論文的版權授權給吉林農業(yè)大學，學校有權保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。2、本人（同意/不同意，務必打印后填寫）吉林農業(yè)大學將本論文版權授權給不同媒體進行電子出版、多媒體出版、網絡出版以及其他形式出版（涉密學位論文解密后應遵守此協(xié)議）。3、本人聲明畢業(yè)后若發(fā)表在攻讀研究生學位期間完成的論文及相關的學術成果，必須以吉林農業(yè)大學作為第一署名單位。學位論文作者簽名：簽字日期：年月日指導教師簽名：簽字日期：年月日摘要磷是植物生長發(fā)育過程中不可或缺的元素，但在田間多以無效的結合態(tài)的磷存在
4、。土壤中的微生物不僅能夠將無效態(tài)的磷轉化為游離態(tài)的有效磷，還可以降解田間殘留的農藥。分離土壤中的解磷菌并加以利用，便可以充分利用土壤中的難溶性磷，創(chuàng)造更大的收益和經濟效益。本實驗從大豆根際土壤中分離純化出了三種既能降解大豆卵磷脂又能降解樂果的有機磷降解菌Yj1、Yj2和Yj3，并對這三種菌進行了鑒定、生長條件優(yōu)化、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和有機磷降解酶的酶活性測定以及有機磷降解酶的分離純化。通過對有機磷降解菌生物學特性及有機磷降解酶酶學性質的研究，一方面可以提高自然界中磷素利用率、減少有機磷農藥在環(huán)境中的殘留，同時為提高有機磷降解率提供基礎理論依據。另一方
5、面，也為降解有機農藥和生產有機磷降解菌劑奠定基礎。經vitek2自動分析系統(tǒng)鑒定，Yj1為靈桿菌同粘質沙雷氏菌（Serratiamarcescens）且與SerratiamarcescensWW4（CP003959.1）的16srDNA相似度為99%。正交試驗對所需培養(yǎng)基進行優(yōu)化，得到該菌株的最佳生長條件為甘露糖、蛋白胨和pH=8的組合。Yj1菌株在兩種磷源條件下，菌株生長量均很低，但72h內以大豆卵磷脂為磷源時的菌體生長情況優(yōu)于樂果。以大豆卵磷脂為磷源時酸性磷酸酶、堿性磷酸酶與有機磷降解酶活性明顯高于以樂果為磷源時的酶活，且72h內堿性磷酸酶活性一直都
6、高于酸性磷酸酶和有機磷降解酶。硫酸銨沉淀法結合陽離子交換層析成功從Yj1菌體中分離純化了有機磷降解酶，SDS-PAGE結果顯示純化的蛋白為單一條帶。且陽離子交換層析的提純倍數是硫酸氨沉淀的5.303倍，硫酸氨沉淀為粗酶的1.416倍。Yj2鑒定為醋酸鈣不動桿菌，與Acinetobactergenomosp.13（FJ694759.1）的16srDNA相似度為99%。正交試驗對所需培養(yǎng)基進行優(yōu)化，得到該菌株的最佳生長條件為葡萄糖、硫酸銨和pH=8的組合。Yj2菌株在兩種磷源條件下，72h內以樂果為磷源時的菌體生長情況優(yōu)于大豆卵磷脂。以大豆卵磷脂為磷源時酸性
7、磷酸酶、堿性磷酸酶活性高于以樂果為磷源時的酶活，而有機磷降解酶活性卻是以樂果為磷源時高于大豆卵磷脂。且72h內酸性磷酸酶活性一直都高于堿性磷酸酶和有機磷降解酶。硫酸銨沉淀法結合陽離子交換層析成功從Yj2菌體中分離純化了有機磷降解酶，SDS-PAGE結果顯示純化的蛋白為單一條帶。且陽離子交換層析的提純倍數是硫酸氨沉淀的10.44倍，硫酸氨沉淀為粗酶的1.327倍。Yj3鑒定為芽孢桿菌（Bacillus），與Bacillussp.B2101（JX266369.1）的16srDNA相似度為99%。正交試驗對所需培養(yǎng)基進行優(yōu)化，得到該菌株的最佳生長條件為葡萄糖、
8、蛋白胨和pH=9的組合。Yj3菌株在兩種磷源條件下，72h內以大豆卵磷脂為磷源時
