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1、南京林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文松材線蟲攜帶致病細(xì)菌產(chǎn)生的毒素的初步研究姓名：梁波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：森林保護(hù)學(xué)指導(dǎo)教師：趙博光2003.6.1摘要f在對(duì)松材線蟲攜帶的細(xì)菌所產(chǎn)生的致萎毒素的研究中，建立一種靈敏、高效的生測方。／≮E；各個(gè)關(guān)鍵。本研究以松材線蟲病高度感病寄主一黑松為生測材料，建立起單細(xì)胞熒光顯示法和切根苗表面消毒生測法。生測結(jié)果顯示，松材線蟲攜帶的假單胞菌PN]、泛菌PAlll和P1細(xì)菌毒素均有較強(qiáng)的毒性，其中PNl細(xì)菌毒素的毒性最強(qiáng)。單細(xì)胞熒光顯示法方法簡單，結(jié)果穩(wěn)定，為今后對(duì)松材線蟲攜帶細(xì)菌的致萎毒素的分離、鑒定工作提供了基礎(chǔ)和前提。接種松材線蟲對(duì)黑松
2、木段和愈傷組織pH值的影響結(jié)果表明，松材線蟲攜帶的微生物在松材線蟲病發(fā)病過程中寄主體內(nèi)pH值降低這一過程中發(fā)揮了很大的作用。人工接種松材線蟲后枯死及半桔死的黑松松枝水提液的pH值及毒性測定結(jié)果表明，隨著病程的進(jìn)展，黑松松枝水提液的酸性有增強(qiáng)的趨勢，當(dāng)發(fā)生松材線蟲病時(shí)，黑松樹體內(nèi)存在著可令黑松細(xì)胞致死的毒性物質(zhì)。，人工接種無菌松材線蟲及細(xì)菌后愈傷組織水提液的毒性測定結(jié)果表明松材線蟲可促進(jìn)細(xì)菌的產(chǎn)毒作用氌H菌毒素原液中添加松材線蟲對(duì)其毒性的影響結(jié)果表明細(xì)菌毒素原液中添加無菌松材線蟲后對(duì)其毒性并無顯著影響?？赏普?，松材線蟲本身不產(chǎn)生毒素，不作用于其攜帶的細(xì)菌所產(chǎn)生的毒索，不
3、能促進(jìn)細(xì)菌毒素的毒性，但可作用于其攜帶的致病細(xì)菌，促進(jìn)細(xì)菌的產(chǎn)毒作用。細(xì)菌培養(yǎng)天數(shù)對(duì)PNl毒素原液毒性的影響結(jié)果表明，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增多，PNl毒素原液對(duì)黑松單細(xì)胞的毒性逐漸增強(qiáng)，當(dāng)培養(yǎng)4d時(shí)，其毒素原液的毒性的升高已幾乎進(jìn)入穩(wěn)定期，因此在假單胞菌PNl細(xì)菌毒素的分離鑒定工作中可將培養(yǎng)4d作為PNl的培養(yǎng)時(shí)間。對(duì)PNl毒素原液透析及透析后各組分的毒性測定結(jié)果表明PNl細(xì)菌毒素并不是單一化合物。對(duì)PNl毒素原液分級(jí)鹽析及鹽析后各組分的毒性測定結(jié)果表明PNl毒素原液在硫酸銨飽和度為30％和90％時(shí)的沉淀組分可能均含有可使黑松單細(xì)胞致死的毒素蛋白類物質(zhì)。關(guān)鍵詞：松材線蟲?。?/p>
4、松材線蟲；致病細(xì)菌；單細(xì)胞熒光顯示法；假單胞菌PNl；毒素PreliminarystudiesonthetoxinsproducedbythepathogenicbacteriacarriedbyBursaphelenchusxylophilusAbstractSensitiveandefficientbioassaymethodsaremostimportanttothestudiesonthetoxinsproducedbythepinewoodnematode—carryingpathogenicbacteria．Twonewbioassaymethods，si
5、nglecellsfluorescencebioassayandsurface—sterilizingbioassayofseedlingswithrootcut，Whichweredeveloped0n也ematedalofhi出ly—susceptiblePinusthunbergii，weredescribedinthisPapeLAllthetoxinsofPNl(尸_eudomonassp．)，PAlll(Pantoeasp．)andPI(Pantoeasp．)whichwereisolatedfromBursaphelenchUSxylophilussho
6、wedpathogenicitytoPthunbergiisinglecellsandseedlingswithrootcut．a(chǎn)mongwhichthePNltoxinswerethemostpathogenic．SinglecellsfluorescencebioassayCanbeappliedinthestudiesontheisolationandidentificationofthetoxinsofpineW001inematode—carryingbacteria，sinceitsproceduresweresimpleanditsobservatary
7、datastable．ExperimentsshowedthatthepHvaluesofPthunbergiiblocksandcallousdecreasedWheninoculatedwithpinewoodnematodes．Itindicatedthatthemicrobescardedby丑．xylophilusplayedanimportantroleinthedecreaseofthepHvalueinthepinetrees’body．TherewasatrendthattheacidityofthewaterextractofPt
