雜質(zhì) 自身對照 校正因子

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1、雜質(zhì)測定中加校正因子的主成分自身對照法：在雜質(zhì)研究中，因某一雜質(zhì)與主成分在某一波長下的響應(yīng)因子不在0.9-1.1范圍內(nèi)，可考慮采用加校正因子的主成分自身對照法。此校正因子可直接載入各品種項下，用于校正雜質(zhì)的實測峰面積。這些需做校正因子的雜質(zhì)，通常以主成分為參照，采用相對保留時間定位，其數(shù)值一并載入各品種項下。（可以理解為校正因子具有法律效應(yīng)的作用）關(guān)于校正因子的理論知識如下：色譜定量分析的依據(jù)是被測組分量與檢測器的響應(yīng)信號(峰面積或峰高)成正比。但是同一種物質(zhì)在不同類型檢測器上往往有不同的響應(yīng)靈敏度；同樣，不同物質(zhì)在同一檢測器上的響應(yīng)靈敏度也往往不同，即相同量的不同物質(zhì)產(chǎn)生不

2、同值的峰面積或峰高。這樣，各組分峰面積或峰高的相對百分?jǐn)?shù)并不等于樣品中各組分的百分含量。色譜的檢測器對不同物質(zhì)有不同的響應(yīng)，換句話說，1mg化合物A在檢測器上能產(chǎn)生1000mAu的響應(yīng)，但同樣是1mg的化合物B在該檢測器上也許就只能產(chǎn)生847mAu的響應(yīng)，所以我們不能在檢測器輸出1000mAu的響應(yīng)時就認(rèn)定樣品中一定含有1mg化合物，這時就必須引入定量校正因子。校正后的峰面積或峰高可以定量地代表物質(zhì)的量，校正因子的作用就是反映某物質(zhì)的量與檢測器響應(yīng)之間的關(guān)系。定量校正因子分為兩種：1、絕對定量校正因子f；f=M/A，（其中M代表被測物質(zhì)的量，A代表檢測器信號響應(yīng)，可以是峰面積

3、或峰高），其意義為單位響應(yīng)所反映的物質(zhì)量。絕對定量校正因子，即單位峰面積所代表的物質(zhì)量。這是以峰面積表示的定量校正因子，也可以用峰高來表示定量校正因子。此外，也有用它們的倒數(shù)來表示的，簡稱為響應(yīng)值。絕對定量校正因子的值隨色譜實驗條件而改變，因而很少使用。2、相對定量校正因子f'；f'=fi/fs=（Mi/Ai）/(Ms/As)=（Mi*As）/（Ms*Ai）,（其中i代表被測定物質(zhì)，s代表選定的基準(zhǔn)物質(zhì)）。定義為某物質(zhì)i與所選定的基準(zhǔn)物質(zhì)s的絕對定量校正因子（即單位峰面積所代表的物質(zhì)的量）之比。絕對定量校正因子一般用于外標(biāo)法，相對定量校正因子一般用于內(nèi)標(biāo)法。色譜法的含量測定中

4、之所以要先用待測成分的對照品來建立校準(zhǔn)曲線，然后才用這個曲線來計算待測樣品中該化合物的含量，實際上就是在測定樣品前先確定校正因子。日常操作中我們都是以：M標(biāo)/A標(biāo)=M樣/A樣直接計算樣品含量了，所以沒太注意有什么校正因子，事實上只要將公式作一個簡單的變形：M樣=A樣*（M標(biāo)/A標(biāo)），不難看出式中的（M標(biāo)/A標(biāo)）其實正是定量校正因子f，那么M樣=A樣*f了。（簡單來說可以理解為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率)所以，用面積歸一化比法做含量測定時，不可簡單地認(rèn)為各成分的峰面積百分比就是它們的含量百分比哦，理由如上所述，各成分含量與響應(yīng)的比例關(guān)系可不一定都相同?。±碚撝R已經(jīng)放在前面了，那就來實際操

5、作的，在雜質(zhì)分析的測定中，加校正因子的主成分自身對照法，那校正因子究竟怎么測定呢？有幾個問題需要明確的：1、測定校正因子時，如何取主成分的濃度，如何取雜質(zhì)的濃度？藥典上說：精密稱取雜質(zhì)對照品和待測成分對照品各適量，配制測定雜質(zhì)校正因子的溶液，進樣測定計算。那“適量”是如何確定的呢？范圍是多少？2、主成分取幾個濃度，雜質(zhì)取幾個濃度？要做線性嗎？校正因子的測定濃度應(yīng)該要在線性范圍內(nèi)？否則無法定量，而不同濃度進樣的校正因子誤差要符合什么要求？3、需要求多少的F值（F值究竟是多大）才能夠符合做標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。因為是加校正因子的主成分的自身對照法，F(xiàn)值必須是在一定范圍內(nèi)是一個定數(shù)，才能寫到

6、標(biāo)準(zhǔn)里面去吧？4、響應(yīng)因子與校正因子是成倒數(shù)關(guān)系，計算響應(yīng)因子是否需要做RSD，那計算響應(yīng)因子的主成分和雜質(zhì)的濃度是選擇多少為合適？5、測定相對校正因子是否需要做方法學(xué)驗證？驗證的內(nèi)容有哪些？（線性范圍？重復(fù)性？還有么？需要做線性嗎？相似濃度下或線性范圍內(nèi)的校正因子的重復(fù)性是不是應(yīng)該在2%以內(nèi)？）6、若已知雜質(zhì)（合成的中間體，自己可以合成，但買不到對照品，只能做結(jié)構(gòu)確認(rèn)）無標(biāo)準(zhǔn)品，只用面積歸一化法測定該物質(zhì)的百分含量，再測水分、干燥失重、殘渣作為必要的補充和扣除就可以了么？測定時首先準(zhǔn)確稱量主成分和已知雜質(zhì)，然后將它們混合均勻進樣，分別測出其峰面積，再進行計算。這樣就可以了么

7、？7、測定校正因子后，操作方法可如下：取供試品溶液和自身對照溶液，分別進樣，測量供試品溶液色譜圖上雜質(zhì)的峰面積，分別乘以相應(yīng)的校正因子后與對照溶液主成分的峰面積比較，依法計算各雜質(zhì)含量。原理：C雜質(zhì)=f*A雜質(zhì)/（A供試品/C供試品）雜質(zhì)%=C雜質(zhì)/C供試品*100%因供試品溶液濃度大，誤差大，采用自身對照法。若為1%自身對照，則C雜質(zhì)=f*A雜質(zhì)/（A自對照/（C供試品/100））=f*A雜質(zhì)*C供試品/A自/100雜質(zhì)%=f*A雜質(zhì)*C供試品/A自/100/C供試品*100%=f*A雜質(zhì)/A自*1%