糖原的顯示PAS反應(yīng)

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1、糖原的顯示(PAS反應(yīng))山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院邢維賢實驗?zāi)康膶嶒炘韺嶒炗闷穼嶒灧椒ㄅc步驟實驗結(jié)果實驗報告目的要求通過PAS反應(yīng)，了解糖原顯示的基本原理、方法以及糖原在細胞中的分布?；驹硖窃蒁-葡萄糖的分支或直鏈組成，在肝和肌肉最豐富。過碘酸是一種強氧化劑，能將葡萄糖中乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成二個游離醛基（—CHO），游離醛基與Schiff‘s試劑反應(yīng)生成紫紅色產(chǎn)物，顏色深淺與多糖含量成正比。由于單糖在固定、脫水和包埋等組織化學(xué)操作過程中被抽提掉，故一般組織標(biāo)本上所能顯示的糖類主要是多糖，包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等。因此要確定此紅色物質(zhì)是否糖原還需要同時進

2、行對照實驗。糖原可被唾液淀粉酶水解，先用唾液淀粉酶作用再進行PAS顯色，若反應(yīng)為陰性，則表明是糖原，反之則為其他多糖。實驗用品1．器材：石蠟切片機，蓋玻片、載玻片、染色缸等．2．試劑0.5%過碘酸溶液；Schiff‘s試劑3．材料：小鼠肝臟石蠟切片切片經(jīng)二甲苯和各級酒精復(fù)水后，入0.5%的過碘酸溶液中作用15分鐘，取出后水洗。注意：過碘酸的氧化是整個實驗中最關(guān)鍵的步驟，過碘酸的作用時間與反應(yīng)環(huán)境溫度有關(guān)，當(dāng)室溫較高時，反應(yīng)較快，過碘酸的作用時間應(yīng)適當(dāng)縮短，當(dāng)室溫較低時，反應(yīng)較慢，過碘酸的作用時間應(yīng)適當(dāng)延長。切片充分洗凈后入Schiff‘s試劑中進行顯色。作用15分鐘左右，將切片取出水洗，為

3、洗去非特異性著色，將切處理品入三級新配制的亞硫酸中進行沖洗，取出后水洗，鏡檢。對照片的設(shè)置為了確保實驗結(jié)果的可信性，在實驗中需設(shè)置陰性對照片。對照片在復(fù)水后，用唾液淀粉酶37℃水解30—60分鐘，取出后水洗，再入過碘酸處理。實驗結(jié)果實驗報告繪圖表示糖元在細胞中的分布情況；在實驗過程中，過碘酸處理能起到什么作用，它和Feulgen反應(yīng)中HCl的作用有何異同？