水貂阿留申病乳膠凝集試驗抗體檢測方法的建立及應(yīng)用

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1、：Ｓ８５８．９２０１８３分類號單位代碼：１研究生學號：２０１５８５４０１０密級：公開吉林大學碩士學位論文專業(yè)學位（）水貂阿留申病乳膠凝集試驗抗體檢測方法的建立及應(yīng)用ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＬａｔｅｘＡｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｔｅｓｔｆｏｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎｇｇｏｏｆＡｎｔｉｂｏｄａａｉｎｓｔＡｌｅｕｔｉａｎＭｉｎｋＤｉｓｅａｓｅｙｇ作者姓名：孫殿鋼類別：獸醫(yī)碩士領(lǐng)域‘（方向）：獸醫(yī)指導教師：雷連成教授培養(yǎng)單位：動物醫(yī)學學院２０１８年

2、０６月水貂阿留申病乳膠凝集試驗抗體檢測方法的建立及應(yīng)用PreparationandApplicationofLatexAgglutinationtestforDetectionofAntibodyagainstAleutianMinkDisease作者姓名：孫殿鋼領(lǐng)域（方向）：獸醫(yī)指導教師：雷連成教授類別：獸醫(yī)碩士答辯日期：2018年6月2日未經(jīng)本論文作者的書面授權(quán)，依法收存和保管本論文書面版本、電子版本的任何單位和個人，均不得對本論文的全部或部分內(nèi)容進行任何形式的復制、修改、發(fā)行、出租、改編等有礙作者著作權(quán)的商業(yè)性

3、使用（但純學術(shù)性使用不在此限）。否則，應(yīng)承擔侵權(quán)的法律責任。吉林大學碩士學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交學位論文，是本人在指導教師的指導下，獨立進行研宄工作所取得的成果Ｄ除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研宄做出重要貢獻的個人和集體，均己在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。如Ｍ學位論文作者簽名：★日期：山Ｗ年６月／日丨中文摘要水貂阿留申病乳膠凝集試驗抗體檢測方法的建立及應(yīng)用水貂阿留申?。ˋleuti

4、andiseaseofmink,AD），由阿留申病毒（Aleutiandiseasevirus,ADV）引起的進行性傳染病。該病不僅能夠?qū)е迈跞旱姆敝衬芰ο陆?，而且還能引起成年水貂消瘦、皮張質(zhì)量降低等問題，使特種養(yǎng)殖行業(yè)承受了巨大的經(jīng)濟損失，嚴重阻礙了我國毛皮行業(yè)的健康發(fā)展。目前公認的辦法是通過檢測來逐步淘汰病貂、弱貂，以達到凈化貂群的作用。ADV特異性抗體檢測是診斷該病的最有效途徑，對流免疫電泳技術(shù)（Convectionimmuneelectrophoresis,CIEP）是ADV血清抗體檢測方法之一，但該方法操作過程比較繁瑣，檢

5、測時間相對較長，加之需要特定儀器設(shè)備，在臨床應(yīng)用上受到了一定的阻礙。因此，建立一種準確率高、省時高效的水貂阿留申病檢測方法勢在必行。本研究將實驗室前期設(shè)計并串聯(lián)表達的水貂阿留申病毒抗原表位（簡稱抗原肽-SD）與羧基化聚苯乙烯微球共價偶聯(lián)，制備抗原肽-SD微球復合物，建立了檢測水貂阿留申病血清中特異性抗體的乳膠微球凝集試驗方法。結(jié)果表明，制備抗原肽-SD微球復合物的最佳條件為：羧基化聚苯乙烯微球以EDC為活化劑、活化時間為15min、pH7.5MES緩沖液反應(yīng)體系、偶聯(lián)時間為30min，蛋白濃度為0.4mg/ml。制備的抗原肽-SD微

6、球復合物為檢測抗原，建立的水貂阿留申病乳膠凝集試驗抗體檢測操作方法為：分別將被檢血清和標準陰、陽性血清稀釋2倍，滴加20?l于載玻片上，同時做平行對照；將20?l抗原肽-SD微球復合物滴加到待檢血清和標準陰、陽性血清對照上，混勻后靜置30s~60s觀察結(jié)果。結(jié)果表明，該復合物可與ADV陽性血清出現(xiàn)較強的凝集反應(yīng)，與偽狂犬病毒、犬瘟熱病毒和水貂腸炎病毒等陽性血清均無凝集反應(yīng)，具有良好的特異性。在1:32稀釋的陽性血清與抗原肽-SD復合物仍能產(chǎn)生微弱的凝集反應(yīng)，表明該方法具有良好的敏感性；該復合物與ADV陰性血清、蒸餾水、MES緩沖液、

7、PBS等無凝集反應(yīng)，不發(fā)生自凝現(xiàn)象。I根據(jù)本試驗所建立的方法，初步研制了便于現(xiàn)場檢測ADV抗體的乳膠微球凝集試劑盒，與CIEP同步檢測本實驗室保存的404份水貂血清樣品，結(jié)果表明，二者的符合率為89.6%。2017年10月，用該試劑盒在打皮期間對大連市瓦房店市的三家水貂養(yǎng)殖場（A場、B場、C場）的373份血清進行檢測。結(jié)果表明，三個場的總陽性感染率分別為：67.85%、66.93%和66.42%。隨后，又對該試劑盒進行了中間試制，結(jié)果表明，該試劑盒在特異性、敏感性和重復性上表現(xiàn)均良好。綜上所述，本研究建立的抗原肽-SD微球凝集方法以

8、及組裝的試劑盒，檢測時間短，敏感性和特異性均良好，與CIEP的符合率較高，檢測結(jié)果不需要復雜處理，為基層貂群提供了一種快速診斷方法，值得推廣，也可為更好地預(yù)防和控制AD提供技術(shù)保障。關(guān)鍵詞：水貂阿留申病，微球，凝集試驗，抗體檢測，血清