實驗5 琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制

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1、實驗五琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制生物化學(xué)實驗之－－山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院【實驗?zāi)康摹苛私獗釋︾晁崦摎涿傅母偁幮砸种谱饔谩！緦嶒炘怼坑捎诒崤c琥珀酸結(jié)構(gòu)相似，可以競爭性地抑制琥珀酸脫氫酶對于琥珀酸的脫氫作用。在生物體內(nèi)，肌肉組織中含有琥珀酸脫氫酶，能催化琥珀酸脫氫轉(zhuǎn)變成延胡索酸，同時放出大量能量供肌體利用。在生物體外，可以人為地提供無氧的條件進(jìn)行實驗，反應(yīng)中生成的FADH2可使氧化型美藍(lán)（藍(lán)色）轉(zhuǎn)變成還原型美藍(lán)（無色）。因此，可以從美藍(lán)的顏色變化觀察琥珀酸脫氫酶的作用。【器材與試劑】（一）器材1.恒溫水浴鍋2.手術(shù)剪3.研缽4.試管5.試管架6.刻度吸管7.漏斗8.小白鼠

2、的肌肉9.脫脂棉10.吸水紙（二）試劑1.0.1mol/L磷酸緩沖液（pH7.4）2.0.02mol/L丙二酸鈉溶液3.0.02mol/L琥珀酸鈉溶液4.0.01%美藍(lán)溶液5.生理鹽水6.液體石蠟【實驗步驟】1.制備肌提液（酶液）：取新殺死的動物肌肉3～5g，加冷的磷酸緩沖液研磨，過濾，低溫保存，備用。試劑試管編號123肌提液（ml）222（煮沸）0.02mol/L丙二酸鈉溶液（ml）—1—蒸餾水（ml）1—10.02mol/L琥珀酸鈉溶液（ml）2220.01%美藍(lán)溶液（滴）5552.取試管3支，按下表操作。3.將各試管搖勻，傾斜試管，沿管壁滴加液體石蠟5滴，蓋在液面，以隔絕空氣

3、。置于370C水浴中保溫，隨時觀察各管中美藍(lán)的褪色情況，并記錄時間，解釋結(jié)果。【要點提示】1.提取酶液需在冰浴中進(jìn)行，以防酶失活。2.實驗過程中，需快速加入試劑，搖勻后迅速加入液體石蠟。3.加液體石蠟的目的是為了使反應(yīng)液與空氣隔絕，因此加液體石蠟時需斜執(zhí)試管，沿管壁加入，不要產(chǎn)生氣泡。4.加完液體石蠟后，在觀察結(jié)果的過程中，不要搖動試管，以免溶液與空氣接觸而使美藍(lán)重新氧化變藍(lán)?！舅伎碱}】1.為什么酶液的提取要在冰浴中進(jìn)行？2.各管中美藍(lán)的褪色情況有何不同？為什么？