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1、臨床檢驗中PCR技術的應用【屮圖分類號1R446.33【文獻標識碼】A【文章編號11672-3783(2012)10-0134-01醫(yī)學檢驗大致可分為形態(tài)學、生物化學、血清免疫學和分子生物學幾大類,其分別代表幾代實驗診斷技術。60年代DNA雙螺旋結構及半保留復制模式的出現(xiàn)，70年代基因重組及體外基因克隆技術、分子朵交技術的應用使分子生物學在疾病診斷中得到了長足的發(fā)展。特別是1985年Mullis發(fā)明了聚合酶鏈式反應(PCR)技術，使醫(yī)學界真正興起了基因診斷技術熱，成為現(xiàn)代醫(yī)學發(fā)展的又一里程碑。用于臨床
2、檢驗的PCR技術與經典的PCR反應在操作上稍有區(qū)別，有其自己的特色。一般在樣品處理上，多采用非離子去污劑一次加熱處理，這種方法對DNA純化冇限，但適應臨床微量、快速的特點。另外PCR反應體系中各組成成份往往都預分裝到反應管中，既減少操作者的工作強度而且也減少了污染的機會，具有極高的使用價值。PCR檢測的臨床應用范I韋I：用于疾病的早期診斷，疾病的鑒別診斷，疾病的病因確定，藥物療效的評價，治療效果的評價，治愈標準的確定。通常用PCR法檢測血清中的乙肝病毒。PCR法檢測乙肝的優(yōu)勢表現(xiàn)在:①早期診斷，因為P
3、CR擴增極其敏感，理論上可檢tB100CID/ml乙肝病毒的患者血清，在感染潛伏期即可被PCR法檢出。②對低持續(xù)感染乙肝病人的診斷，有些乙肝病人體內的病毒長期低復制感染，血清病毒濃度極低，一般酶標試劑無法檢出，可以用PCR法檢出。①療效跟蹤及病程判斷，因為PCR能半定量檢測乙肝病毒基因，是病毒是否存在及其數(shù)量多少的最直接指標。在治療過程中通過監(jiān)測血清或白細胞中病毒基因存在與否及其動態(tài)變化即能準確地了解病情。丙型肝炎病毒在血清中的濃度很低，丙肝病毒的分離尚未成功。目前用于丙肝病毒檢驗的方法主要是ELIS
4、A法測定血清中的IICV抗體。由于IICV尚無法分離純化，所以用于包被的抗原是人工合成肽或基因工程蛋白，這些人工抗原與天然病毒抗原冇一定的區(qū)別，理論上是存在假陽性或假陰性。同時血清中抗體的出現(xiàn)及動態(tài)變化與病人病情無線性相關關系。RT-PCR技術使這些困難得到解決。HCV是RNA病毒，需先將病毒RNA逆轉錄為cDNA(RT)后再進行PCR擴增，這種技術稱之為逆轉錄-PCR(RT-PCR)oPCR檢測在性傳播性疾病(STD)的診斷中有較廣泛的應用。經典的性傳播疾病冇梅毒、淋病、腹股溝淋巴肉芽腫、軟銳濕癰、
5、硬下疳等。而在現(xiàn)代STD中、解尿支原體及沙眼衣原體引起的非淋菌性尿道炎(NGU)可能更具有代表性意義。檢測標本無特殊限制：痰、尿、腹水、胸水、關節(jié)液、血、肺泡灌洗液、腦脊液、分泌物等均可送檢PCR檢測淋球菌。淋病的臨床表現(xiàn)缺乏特異性，其確診主要是進行實驗室檢查。傳統(tǒng)的方法有涂片染色法，分離培養(yǎng)法和用來檢測淋球菌抗原的EIA-Gonozyme系統(tǒng)法。近年來，熒光定量PCR診斷技術的應用，使淋病的快速診斷有重大突破。循環(huán)系統(tǒng)以腸道小RNA病毒感染最具代表意義，如柯薩奇病毒等。這些病毒經腸道粘膜、淋巴結進入
6、血液，最終可定位于心肌細胞中導致心肌炎。目前対這些病毒的血液樣木檢測往往比較困難。PCR用于柯薩奇病毒檢測時因其是RNA病毒所以應注意樣本的保存。外在環(huán)境中存在大量RNA酶，病毒脫殼后RNA將被迅速降解。一般用于RNA檢測的血清常溫下不應超過24小時，4°C下可保存2天，-20°C下可以保存2月以下。PCR敏感性高可以檢測出血清中低濃度的病毒，了解病毒在體內復制的動態(tài)狀況。參考文獻[1]《中國醫(yī)學檢驗雜志》.2001,11：13-14[2]姜懷春?per技術研究新進展?重慶工商大學報，2005.22(
7、4)：232-235
