實驗三 糞便隱血試驗

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1、實驗三糞便隱血試驗【目的】掌握糞便隱血試驗(OBT)鄰聯(lián)甲苯胺法的方法及其評價。【原理】血紅蛋白中的亞鐵血紅素有類似過氧化物酶的活性,能催化過氧化氫分解釋放新生態(tài)氧,將受體鄰聯(lián)甲苯胺氧化成鄰甲偶氮苯而顯藍(lán)色。一、鄰聯(lián)甲苯胺法【操作】1.制備涂片2.滴加試劑3.結(jié)果判斷4.報告方式二、單克隆抗體膠體金法【目的】熟悉隱血試驗的單克隆抗體膠體金檢測法?!驹怼磕z體金是由氯化金和枸櫞酸合成的膠體物質(zhì),具有膠體化的性質(zhì),呈紫紅色。特制的乙酸纖維膜上含均勻分布的膠體金標(biāo)記的羊抗人Hb單克隆抗體和無關(guān)膠體金標(biāo)記鼠IgG,膜的上端由上至下依次包被羊抗鼠IgG抗體和羊抗人Hb多抗。

2、檢測時,試紙條浸入被檢的稀釋糞便液中,糞便懸液通過層析的作用,沿著試紙條上行,如糞便中含有Hb,在上行過程中與膠體金標(biāo)記羊抗人Hb單克隆抗體結(jié)合,待行至羊抗人Hb多抗體線時,形成金標(biāo)記的抗人Hb單抗-糞Hb-羊抗人Hb多抗復(fù)合物,在紙條上顯現(xiàn)一條紫紅色線,即為隱血試驗陽性;試帶上無關(guān)的金標(biāo)記鼠IgG隨糞便懸液上行至羊抗鼠IgG處時,與之結(jié)合形成又一條紫紅色線,為陰性對照線(試劑質(zhì)控線),即隱血試驗陽性時試帶出現(xiàn)2條紫紅色線,如果只顯現(xiàn)1條紫紅色線為隱血試驗陰性,試帶無紫紅色線出現(xiàn)即說明已失效?!静僮鳌?.制備糞便懸液2.浸試帶3.結(jié)果判斷4.報告方式【注意事項】1

3、.實驗所用的器材用具要清潔、干凈無酸堿殘留,無鐵劑、血跡等污染。2.試劑(1)化學(xué)法試劑:H202最好新鮮配制,做標(biāo)本檢測時應(yīng)做陰、陽性對照試驗。(2)金標(biāo)試紙質(zhì)量:如試紙滲透性差,糞液滲透不良,可造成假陰性。3.結(jié)果分析(1)化學(xué)法:①反應(yīng)時間不足,尤其溫度低時;②糞便中存在抑制過氧化物酶的物質(zhì);③糞便留取時間較長,血紅蛋白被細(xì)胞分解。(2)膠體金法:①上消化道出血患者有時可因為血紅蛋白經(jīng)過腸道消化酶降解變性而不具有原來的免疫原性,單克隆抗體與血紅蛋白抗原不匹配;②消化道出血過多,抗原過剩出現(xiàn)后帶現(xiàn)象;③糞便留取時間較長,血紅蛋白被細(xì)胞分解。

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