實(shí)驗(yàn)三 糞便隱血試驗(yàn)

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1、實(shí)驗(yàn)三糞便隱血試驗(yàn)【目的】掌握糞便隱血試驗(yàn)（OBT）鄰聯(lián)甲苯胺法的方法及其評(píng)價(jià)?！驹怼垦t蛋白中的亞鐵血紅素有類似過氧化物酶的活性，能催化過氧化氫分解釋放新生態(tài)氧，將受體鄰聯(lián)甲苯胺氧化成鄰甲偶氮苯而顯藍(lán)色。一、鄰聯(lián)甲苯胺法【操作】1．制備涂片2．滴加試劑3．結(jié)果判斷4．報(bào)告方式二、單克隆抗體膠體金法【目的】熟悉隱血試驗(yàn)的單克隆抗體膠體金檢測(cè)法。【原理】膠體金是由氯化金和枸櫞酸合成的膠體物質(zhì)，具有膠體化的性質(zhì)，呈紫紅色。特制的乙酸纖維膜上含均勻分布的膠體金標(biāo)記的羊抗人Hb單克隆抗體和無關(guān)膠體金標(biāo)記鼠IgG，膜的上端由上至下依次包被羊抗鼠IgG抗體和羊抗人Hb多抗。

2、檢測(cè)時(shí)，試紙條浸入被檢的稀釋糞便液中，糞便懸液通過層析的作用，沿著試紙條上行，如糞便中含有Hb，在上行過程中與膠體金標(biāo)記羊抗人Hb單克隆抗體結(jié)合，待行至羊抗人Hb多抗體線時(shí)，形成金標(biāo)記的抗人Hb單抗-糞Hb-羊抗人Hb多抗復(fù)合物，在紙條上顯現(xiàn)一條紫紅色線，即為隱血試驗(yàn)陽性；試帶上無關(guān)的金標(biāo)記鼠IgG隨糞便懸液上行至羊抗鼠IgG處時(shí)，與之結(jié)合形成又一條紫紅色線，為陰性對(duì)照線（試劑質(zhì)控線），即隱血試驗(yàn)陽性時(shí)試帶出現(xiàn)2條紫紅色線，如果只顯現(xiàn)1條紫紅色線為隱血試驗(yàn)陰性，試帶無紫紅色線出現(xiàn)即說明已失效。【操作】1．制備糞便懸液2．浸試帶3．結(jié)果判斷4．報(bào)告方式【注意事項(xiàng)】1

3、．實(shí)驗(yàn)所用的器材用具要清潔、干凈無酸堿殘留，無鐵劑、血跡等污染。2．試劑（1）化學(xué)法試劑：H202最好新鮮配制，做標(biāo)本檢測(cè)時(shí)應(yīng)做陰、陽性對(duì)照試驗(yàn)。（2）金標(biāo)試紙質(zhì)量：如試紙滲透性差，糞液滲透不良，可造成假陰性。3．結(jié)果分析（1）化學(xué)法：①反應(yīng)時(shí)間不足，尤其溫度低時(shí)；②糞便中存在抑制過氧化物酶的物質(zhì)；③糞便留取時(shí)間較長(zhǎng)，血紅蛋白被細(xì)胞分解。（2）膠體金法：①上消化道出血患者有時(shí)可因?yàn)檠t蛋白經(jīng)過腸道消化酶降解變性而不具有原來的免疫原性，單克隆抗體與血紅蛋白抗原不匹配；②消化道出血過多，抗原過剩出現(xiàn)后帶現(xiàn)象；③糞便留取時(shí)間較長(zhǎng)，血紅蛋白被細(xì)胞分解。