枸杞子多糖提取工藝優(yōu)化及體外抗氧化活性探究

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1、枸杞子多糖提取工藝優(yōu)化及體外抗氧化活性探究作者：劉長(zhǎng)建姜波劉亮范圣第【摘要】目的研究枸杞子多糖的提取及抗氧化活性。方法采用水提法提取枸杞子中的多糖，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)研究了固液比、提取溫度、提取時(shí)間對(duì)枸杞子多糖提取得率的影響，并進(jìn)行了提取次數(shù)實(shí)驗(yàn)。采用軽基自由基、超氧陰離子自由基體系，對(duì)枸杞子多糖的抗氧化活性進(jìn)行了研究，并與維生素C進(jìn)行了比較。結(jié)果確立了水提法提取枸杞子多糖的最佳工藝條件為提取溫度80°C,固液比1：30,提取時(shí)間3.5h,提取2次。當(dāng)多糖濃度達(dá)到229.5ug/ml時(shí)，清除率達(dá)到48.1%,維生素C的清

2、除率為41.2%。對(duì)超氧陰離子自由基的清除率低于維生素C,當(dāng)多糖濃度達(dá)到229.5Ug/ml時(shí)，清除率達(dá)到13.5%,維生素C的清除率為48.6%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)單、環(huán)保，枸杞子中多糖含量為8.34%O枸杞子多糖對(duì)這兩種自由基均有不同的抑制作用。對(duì)軽基自由基的清除率高于維生素Co【關(guān)鍵詞】枸杞子多糖提取正交實(shí)驗(yàn)抗氧化活性枸杞子為茄科(Solanaceae)植物枸杞LyciumchinenseMill的成熟果實(shí)，是我國(guó)傳統(tǒng)的滋補(bǔ)中藥材?！侗静菥V目》中記載枸杞子具有堅(jiān)筋骨、補(bǔ)精氣諸不足、明目安神、令人長(zhǎng)壽等功效［1］。近

3、年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，植物多糖具有抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功效，已是當(dāng)前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)［2?5］。目前人們對(duì)枸杞子多糖進(jìn)行了較廣泛的研究，發(fā)現(xiàn)枸杞多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗疲勞、護(hù)肝、防輻射、抗缺氧等功效［6?8］,同時(shí)對(duì)多糖的分離與純化進(jìn)行了一些研究［9,10］,但對(duì)提取的工藝條件研究較少。本文對(duì)影響枸杞子多糖提取因素進(jìn)行了正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選出最佳的枸杞子多糖提取的工藝參數(shù)，同時(shí)進(jìn)行了枸杞子多糖的體外抗氧化活性研究，以期為研究開(kāi)發(fā)枸杞子多糖新的藥物功能及保健食品提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。1材料與方法1

4、.1儀器與試劑上海尤尼柯儀器有限公司產(chǎn)WFJ2100型分光光度計(jì)；上海安亭精密儀器廠產(chǎn)TDL80-28臺(tái)式離心機(jī)；所用試劑均為分析純?cè)噭?.2藥材枸杞子，原產(chǎn)寧夏，購(gòu)于大連開(kāi)發(fā)區(qū)。1.3枸杞子多糖的提取1.3.1枸杞子多糖提取的工藝流程及方法在參考已有其它種類多糖提取方法［11］的基礎(chǔ)上，利用水提的方法,采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)枸杞子多糖的提取條件進(jìn)行優(yōu)化，以確立最佳工藝條件。枸杞子多糖提取的工藝流程見(jiàn)圖1。圖1枸杞子提取工藝流程示意圖（略）準(zhǔn)確稱取已于7(rc烘干并粉碎的枸杞子2g于三角瓶中，按設(shè)計(jì)好的正交實(shí)驗(yàn)條件在恒溫

5、水浴中進(jìn)行提取，然后將其以4000r/min離心18min,得上清液，經(jīng)濃縮，再加入5倍體積的乙醇，搖勻后，在冰箱中放置過(guò)夜，以4OOOr/min離心20min。沉淀經(jīng)干燥后得到粗多糖。采用硫酸一苯酚法［11］測(cè)定所提取的枸杞子多糖中多糖含量，然后根據(jù)所用枸杞子的質(zhì)量(2g)計(jì)算出枸杞子中多糖得率。1.3.2正交實(shí)驗(yàn)選用L9(33)正交實(shí)驗(yàn)，確定提取枸杞子多糖的最佳工藝參數(shù)，水平因素見(jiàn)表1。表1正交水平(略)1.3.3多糖含量測(cè)定采用硫酸-苯酚法測(cè)定提取的枸杞子多糖含量［11］,葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)為0.998

6、8,線性方程為Y=0.007Xo由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品中多糖濃度，由下列公式計(jì)算樣品枸杞子中多糖含量。多糖含量(%)二樣品濃度X稀釋倍數(shù)X樣品體積多糖試樣質(zhì)量X100%枸杞子多糖得率(%)二計(jì)算測(cè)得多糖的質(zhì)量枸杞子樣品質(zhì)量(2g)X100%1.4體外抗氧化活性[12]1.4.1軽基自由基體系利用Eenton體系測(cè)定枸杞子多糖對(duì)亞鐵離子催化過(guò)氧化氫產(chǎn)生?0H的清除能力。由于?0H可特異地使番紅花紅褪色，根據(jù)褪色程度用比色法測(cè)量?0H含量。每支試管分別加入0.15mol/LpH=7.4磷酸緩沖液1.5ml,260ug/ml

7、番紅花紅0.2mlo1.0mmol/LEDTA-Na2-Fe2+0.7ml,再分別加入一定濃度各級(jí)多糖試樣1.0ml,最后加入2%H2020?8ml,混勻后于37°C水浴保溫30min?？瞻滓哉麴^水代替試樣，對(duì)照組則以蒸館水代試樣和EDTA-Na2-Fe2+于520nm測(cè)吸光度值，并以Vc作對(duì)比。清除率E(%)=(A樣品-A空白)/(A對(duì)照-A空白)X100%1.4.2超氧陰離子體系采用鄰苯三酚自氧化法，在一定條件下，鄰苯三酚能夠自氧化產(chǎn)生?02-,加入一定量的多糖液可對(duì)?02-產(chǎn)生不同的抑制作用，進(jìn)而導(dǎo)致光吸收值

8、的變化。取0.05mol/LpH8.2Tris-HCl緩沖液5ml于試管中，分別加入1ml—定濃度的各級(jí)多糖試樣液，置于251水浴中預(yù)熱20min,再加3mmol/L鄰苯三酚0.4ml,混勻，于25*水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)4min,立即用濃HC10.5ml終止反應(yīng)，并在320nm處測(cè)吸光度?？瞻讓?duì)照組以相同體積Tris-HCl代替樣品，每個(gè)試管做3個(gè)平行，取平均值，