擬南芥窄葉抗病突變體27.2基因的圖位克隆與功能研究.pdf

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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)ShandongAgriculturalUniversityPh.D.DISSERTATIONMap—basedCloningandFunctionalAnalysisofanArabidopsisMutant27.2withNarrowLeafandDiseaseResistanceDepartment:PlantProtectionMajor:PlantPathologyPh.D.Candidate:WeiYangSupervisor:ProfessorXinhuaDing2014.06.07萬(wàn)方

2、數(shù)據(jù)關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文,是在導(dǎo)師指導(dǎo)下,獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對(duì)在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體,均在文中明確說(shuō)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定,同意學(xué)校保留和按要求向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文,同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所

3、將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》,并向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名:苧塹熙導(dǎo)師簽名:丁親彳摯日期:№』乒4-//萬(wàn)方數(shù)據(jù)符號(hào)說(shuō)明縮寫(xiě)符號(hào)英文名中文名cDNAcomplementaryDNA互補(bǔ)DNAETETIGCGFPHPLCHRICSlJALRRMeJANahGNONPRlPCDPDFl.2PRPTIethyleneEffector-triggeredimmunity乙烯效應(yīng)子觸發(fā)的免疫反應(yīng)gaschromatography氣相色譜greenfluoresce

4、ntproteinlli曲performanceliquidchromatographyHypersensitiveresponseIsochorismatesynthase1JasmonicacidLeucine-richrepeatmethyljasmonateSalicylatehydroxylaseNitricoxide綠色熒光蛋白高效液相色譜超敏反應(yīng)異分支酸合成酶1茉莉酸亮氨酸富集重復(fù)茉莉酸甲酯水楊酸羥化酶一氧化氮nonexpressorofpathogenesis-relatedgenes1病程相

5、關(guān)基因非表達(dá)子1Programmedcelldeath細(xì)胞程序化死亡plantdefensin植物防衛(wèi)素PathogenesisrelatedproteinPAMP-triggeredimmunityRNA·SeqRNAsequencingROSSASADSARSNPSSRreactiveoxygenspeciessalicylicacid病程相關(guān)蛋白PAMP觸發(fā)的免疫反應(yīng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序活性氧水楊酸Stearoyl.a(chǎn)cylcarrierproteindesaturase硬脂酰?;d體蛋白去飽和酶Systemic

6、acquiredresistance系統(tǒng)獲得性抗性singlenucleotidepolymorphism單核苷酸多態(tài)性Simplesequencerepeat簡(jiǎn)單序列重復(fù)萬(wàn)方數(shù)據(jù)目錄摘要一????一一????????????一一ABSTRACT刖舌~I(xiàn)IIIl植物抗性機(jī)制研究進(jìn)展1.1擬南芥抗病基因的克隆1.2植物抗病基因的結(jié)構(gòu)1.3抗病基因的分類(lèi)一.3?4?)一13—15—161.4植物抗病信號(hào)分子及其網(wǎng)絡(luò)2SSl2基因研究現(xiàn)狀3蛋白互作研究技術(shù)進(jìn)展3.1酵母雙雜交3.2雙分子熒光互補(bǔ)?一3.3Pull.

7、down技術(shù)與免疫共沉淀4本研究的目的與意義.17第二章27.2突變體基因的圖位克隆及功能鑒定1材料與方法17~19—191.1擬南芥材料及培養(yǎng)1.2菌株和載體1.3常用酶與生化試劑1.4常用儀器1.5溶液及培養(yǎng)基的配制1.6核酸操作及載體構(gòu)建1.6.1DNA及RNA抽提.1920........201.6.2RT-PCR和定量PCR分析1.6.3感受態(tài)細(xì)胞的制備1.6.4熱激轉(zhuǎn)化大腸桿菌(DH5a)20........231.6.5電轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞(GV3101)1.6.6轉(zhuǎn)化菌落的陽(yáng)性鑒定2324萬(wàn)

8、方數(shù)據(jù)1.6.7質(zhì)粒DNA的提取1.7擬南芥基因的克隆與轉(zhuǎn)化????一1.8病原菌ntDC3000接種和細(xì)菌生長(zhǎng)分析1.9細(xì)胞學(xué)染色1.10擬南芥葉片脂肪酸測(cè)定2結(jié)果與分析?一???..2.127.2突變體的鑒定2.227.2基因圖位克隆2.327.2的表型介于野生型和T-DNA突變體之間2.427.2的去飽和酶活性降低2.5SSl2基因三個(gè)突變體的表達(dá)譜分析252627332.6qRT-PCR驗(yàn)證

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