擬南芥氮素營養(yǎng)相關(guān)基因的圖位克隆及其初步功能驗證

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1、萬方數(shù)據(jù)分類號:盤"I【1籮jUDC:鋤5。:密級:單位代碼:10798擬南芥氮素營養(yǎng)相關(guān)基因的圖位克隆及其初步功能驗證Map--basedCloningofArabidopsisNNutritionGenesandPreliminary量。UnctJonalVerlllcatlonn·●_f’∽■二級學(xué)科:作物遺傳育種研究方向:分子遺傳育種研究生:麻艷超指導(dǎo)教師:東方陽教授徐江研究員所在院所:生命科技學(xué)院2014年6月萬方數(shù)據(jù)獨創(chuàng)性聲明lIIitlIIIIIIIIIIIIIIIIlY2762076本人聲明所呈交的學(xué)位論文是

2、本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作和取得的研究成果,除了文中特別加以標注和致謝之處外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得塑皇魚越豎整堂瞳或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名:季衣手互殛簽字日期:晰年∥月J尸日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解塑苧墾趑堙整堂睦有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定。特授權(quán)塑蘭墾越堙堇堂睦可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索,并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段

3、保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)說明)學(xué)位論文作者簽名徘憋簽字日期.徹午年‘月壚萬方數(shù)據(jù)縮略詞英文縮寫英文全稱中文名稱K旺’NRNiRGS/GOGATGSGOGATASCPSaseRFLPPCRRAPDDAFSSRSSLPISSRSTSSCARAminoAcidTransporterNitrateReductaseNitriteTeductaseGlutamineSynthetase/GlutamateSynthasePathwayGlutami

4、neSynthetaseGlutamateSynthaseAsparagineSynthetaseCarbamylPhosphataseRestrictionFragmentLengthPolymorphismPolymeraseChainReactionRandomAmplifiedPolymorphicDNAAmplifiedFingerprintsSimpleSequenceRepeatsSimpleSequenceLengthPolymorphismInter-simpleSequenceRepeatSequence

5、TaggedSiteSequenceSharacterizedAmplifiedRegion氨基酸轉(zhuǎn)運體硝酸還原酶亞硝酸還原酶谷氨酰胺合成酶/谷氨酸合成酶途徑谷氨酰胺合成酶谷氨酸合成酶天冬酰胺合成酶氨甲酰磷酸酶限制性長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)隨機擴增多態(tài)性DNA分子標記DNA擴增指紋簡單序列片段簡單序列長度多態(tài)性簡單序列重復(fù)間區(qū)序列標簽位點序列特征化擴增區(qū)域cAPscleavedAmplifiedP。lYmorpllic酶切擴增多態(tài)性序列CS曰母訓(xùn)珂瑁多念1王t}予少USequenceDeftvedCleavedAmplifie

6、dPolymorphic衍生的酶切擴增多態(tài)性dcAPss.equence序列廠r歲USNPSingleNucleotidePolymorphism單核苷酸多態(tài)性AS—PCRAllele.SpecificPCR等位基因特異性PCR萬方數(shù)據(jù)摘要氮素是植物生長發(fā)育所必需的礦質(zhì)元素之一,同時是影響農(nóng)作物產(chǎn)量的主要因素之一。隨著氮素資源和環(huán)境問題日益嚴峻,利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高作物的氮素利用效率具有重要的理論和應(yīng)用價值。本研究以由EMS誘變擬南芥C01.0生態(tài)型背景材料獲得的兩株耐低氮突變體Int3和Int5為材料,利用基因圖位克隆的方法

7、,篩選到與擬南芥氮素營養(yǎng)相關(guān)的重要基因。利用Int3突變體材料成功克隆到TT8基因,在擬南芥中,m基因的表達產(chǎn)物為TT8蛋白,該蛋白屬于堿性螺旋.環(huán)一螺旋(basic.helix—loop.helixdomain.bHLH)轉(zhuǎn)錄因子。在Int3突變體中,m基因外顯子上的第760個堿基由C突變?yōu)門,導(dǎo)致編碼氨基酸的密碼子由CAA突變?yōu)榻K止密碼子UAA,氨基酸翻譯提前終止,基因發(fā)生無義突變;通過對Int5突變體氮素相關(guān)基因圖位克隆,最終將目的基因定位于SSLP分子標記5-5654與5-5443兩個分子標記之間,標記之間距離為21

8、lkb,跨越了MKPll、F2K13和F5E19共3個BAC重疊克隆群。本研究還開發(fā)了21對SSLP分子標記和兩對CAPS分子標記,同時改進了根據(jù)SNP位點等位基因差異設(shè)計分子標記的方法,為基因檢測和圖位克隆提供更豐富的分子標記資源,節(jié)省研究時間,提高克隆效率。目前,丁髓基因研究表明該基因

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