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1、第七章植物脫毒和快速繁殖技術(shù)組員：賀秀娟葉研春 韓婷花韓秀麗 白秉元馬延梅第一節(jié)植物脫毒的原理一熱處理脫毒1.高溫短時(shí)處理法這種方法是利用病毒與植物耐熱能力的不同，將木苗、接穗或種子等繁殖材料在一定的高溫下處理一段時(shí)間，將其體內(nèi)的病原殺死或鈍化，失去侵染能力，而保持其本身的生活力，從而達(dá)到脫毒的目的。該法尤其適用于類菌原體、類細(xì)菌的脫毒，而對(duì)于類病毒的脫毒效果較差，因?yàn)轭惒《就ǔＳ休^強(qiáng)的熱穩(wěn)定性。這種處理方法與1921年首先用于甘蔗的脫毒，國內(nèi)用這種方法處理柑橘，可脫除柑橘材料內(nèi)的黃龍病類細(xì)菌。2低熱長時(shí)處理法低熱長時(shí)處理一般不能使整株植株脫毒，而只能使個(gè)別器官脫毒，大多是使在熱處理過
2、程中長出的莖尖無病毒。因此，處理的最后步驟是要取新產(chǎn)生的莖尖嫁接到無毒實(shí)生碊木上或?qū)⑿庐a(chǎn)生的莖尖進(jìn)行扦插繁殖，以獲得脫病毒植株。但對(duì)不同病毒及不同植物種類的脫毒率差異很大。二、組織培養(yǎng)脫毒1.莖尖培養(yǎng)脫毒Morel等（1952）首先從感染有花葉病毒的大麗花上分離出莖尖分生組織（0.25mm）培養(yǎng)得到植株，嫁接在大麗花實(shí)生砧木上檢驗(yàn)未無病毒植株。從此，莖尖培養(yǎng)就成為脫去病毒的一個(gè)有效途徑，并相繼在馬鈴薯、菊花、蘭花等莖尖培養(yǎng)脫毒的研究中獲得成功。莖尖培養(yǎng)脫毒可脫除多種病毒、類病毒、類菌原體和類立克次體，很多不能通過熱處理脫除的病毒可以通過莖尖培養(yǎng)而脫掉。莖尖培養(yǎng)脫毒直接從莖尖生長獲得植株
3、，很少有變異，能很好地保持品種的特性。莖尖培養(yǎng)之所以能脫除病毒，是因?yàn)楦腥静《镜闹仓甑挠啄奂拔闯墒斓慕M織和器官中病毒含量較低，生長點(diǎn)（約0.1~1.5mm區(qū)域）則幾乎不含病毒或含病毒很少。植物莖尖等分生組織中不含或很少含有病毒的原因：（1）植物莖尖分生組織中胞間連絲發(fā)育不完全或太細(xì)，使病毒在細(xì)胞之間的擴(kuò)散作用受到抑制。（2）病毒復(fù)制、運(yùn)輸速度與莖尖細(xì)胞生長速度不同，病毒向上運(yùn)輸速度慢，而而分生組織細(xì)胞繁殖快，結(jié)果使莖尖區(qū)域部分的細(xì)胞沒有病毒。（3）植物生長點(diǎn)細(xì)胞中缺少病毒增值的感受點(diǎn)，因而復(fù)制過程不能進(jìn)行。（4）莖尖等分生組織中存在抑制、鈍化病毒的物質(zhì)（5）莖尖或其他組織在培養(yǎng)過程中病
4、毒被鈍化或抑制2.莖尖微芽嫁接脫毒莖尖微芽嫁接脫毒是組織培養(yǎng)與嫁接相結(jié)合，用以獲得無病毒苗木的一種新技術(shù)。他將0.1~0.3mm的莖尖作為接穗，嫁接到由試管中培養(yǎng)出來的無毒實(shí)生砧木上，繼而進(jìn)行試管培養(yǎng)，愈合成為完整植株的脫毒方法。它可消除用熱處理不能除去的一些病毒，如衰退病毒、木質(zhì)陷孔病毒、黃脈病毒等。莖尖微芽嫁接脫毒可以解決一些果樹莖尖培養(yǎng)成苗難，特別是生根困難的問題。有些果樹種類或品種，如格瑞弗斯蘋果通過莖尖組織培養(yǎng)，可以獲得無病毒新梢，但不能生根，只有通過莖尖微芽嫁接脫毒才能獲得完整植株。3.其他外植體的組織培養(yǎng)方法脫毒除莖尖培養(yǎng)外，還可從花粉、花藥、胚、胚珠及珠心等組織培養(yǎng)獲得
5、無病毒的植株。這些器官或組織也是植株中含病毒較少的部位，但不同病毒或不同寄主植物使他們帶毒或不帶毒的情況各不相同，采用這些器官脫毒時(shí)，首先應(yīng)弄清楚其帶毒情況。關(guān)于一些植物種胚中不攜帶病毒的原因有兩種觀點(diǎn)：一種觀點(diǎn)認(rèn)為病毒不能進(jìn)入胚中，植物子房中胚與其他母體細(xì)胞之間缺少維管束組織和胞間連絲的關(guān)系；另一種是認(rèn)為病毒能進(jìn)入胚，但進(jìn)入后為寄主所消滅。有這樣一種現(xiàn)象，種子在未成熟時(shí)帶有病毒，到成熟時(shí)，病毒就消失了，這就說明，即使沒有胞間連絲，病毒還可以通過其他途徑進(jìn)入胚中，但是有些植物的種子中存在著一種抑制病毒的物質(zhì)。此外，還有人認(rèn)為是有些種胚中缺少病毒增值所需要的重要物質(zhì)。而使病毒不能復(fù)制對(duì)于
6、一些果樹植物要獲得與親本一致的無性系無病材料，可以從胚囊敗育的子房中在胚囊敗育之前獲取胚珠或珠心組織進(jìn)行培養(yǎng)。 花藥或花粉培養(yǎng)也可以作為一種脫毒方法，這種方法可結(jié)合單倍體育種進(jìn)行，用花藥培養(yǎng)進(jìn)行草莓脫毒，脫毒率可達(dá)100%?；ㄋ幣囵B(yǎng)獲得的無毒材料多為高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的類型。 植物的感染病組織中不是所有細(xì)胞都含有病毒。因此，也有人從感病植株分離原生質(zhì)體、愈傷細(xì)胞或其他細(xì)胞，繼而培養(yǎng)獲得植株，然后通過鑒定病毒從中選擇無病的材料三、其他脫毒方法1.合并使用熱處理、莖尖培養(yǎng)或微芽嫁接脫毒這種脫毒方法是從經(jīng)熱處理后的新梢頂端切取一段嫩梢，再嫁接到事先準(zhǔn)備好的實(shí)生砧木上，如果用徒手嫁接，枝梢的長度至少
7、要達(dá)到1.0~1.5cm方可。若要使這樣長的嫩梢無病毒，對(duì)于蘋果至少須熱處理3~4周，而一些耐熱性弱的品種，在熱處理期間，因高溫傷害，大部分枯死，或嫁接后成活率很低。用莖尖培養(yǎng)脫毒，需要用很小的莖尖才能脫除病毒，通常采用的莖尖大小為0.1~0.2mm，因莖尖太小往往成活率很低。對(duì)于莖尖嫁接也有類似情況，莖尖太小往往不能成活。因此，莖尖培養(yǎng)、莖尖嫁接不僅很難操作，而且一些病毒不能脫去，如單純的莖尖嫁接不能脫除柑橘碎葉病毒。合并使用熱處理、莖尖培養(yǎng)
