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《慢性乙型肝炎患者樹(shù)突狀細(xì)胞培養(yǎng)與功能檢測(cè)方法.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、慢性乙型肝炎患者樹(shù)突狀細(xì)胞培養(yǎng)與功能檢測(cè)方法【摘要】H的：建立從人外周血分離培養(yǎng)樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcell,DC)及檢測(cè)其表型與誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖能力的方法。方法:從未接受抗病毒治療的CHB患者外周血屮分離單個(gè)核細(xì)胞，在含GM-CSF.IL-4、TNF-a的完全培養(yǎng)基屮誘導(dǎo)培養(yǎng)為DC,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型，混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測(cè)DC刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力。結(jié)果:CHB患者外周血單核細(xì)胞，在體外可誘導(dǎo)出具有典型形態(tài)及生物學(xué)活性的DC?；颊逥C的HLA?DR、CD80、CD86的表達(dá)率分別為(44.77±8.127)%、(36.65±6.867)%、(32.16±6.340)%,CHB
2、患者DC刺激淋巴細(xì)胞增殖的SI為1.39±0.375。與正常人DC相比明顯降低(P<0.01)o結(jié)論:CHB患者單個(gè)核細(xì)胞能被誘導(dǎo)培養(yǎng)為DC；通過(guò)檢測(cè)DC表型和刺激淋巴細(xì)胞增殖能力可以了解CHB患者抗HBV免疫功能?！娟P(guān)鍵詞】樹(shù)突狀細(xì)胞慢性乙型肝炎免疫狀態(tài)AbstractObjective：ToestablishthemethodofculturingDCfromhumanperipheralbloodandtestingthephenotypeandthecapacityofstimulatingleukocyte?Methods：SelectingCHBwithoutreceivi
3、ngantiviraltreatment,PBMCswereseparatedfromperipheralblood,日ndthenculturedinvitrowithmediumcontainingGM-CSFIL-4INF-uintoDC.ThephenotypeofDCwasidentifiedbyflowcytometry.TheabilitiestostimulateTcellproliferateweredetectedbymixedleukocytesreaction(MLR).Results:PBMCfromCHBpatientswhichwereculturedinvit
4、rocouldbeinducedintotypicalDC.TheexpressionofcostimulatingmoleculesCD80>CD86、HLA-DRinthesurfaceofDCsfromCHBpatientsbeforeantiviraltreatmentwere(32.16±6.340)%、(36.65±6.867)%、(44.77±8.127)%.Thestimulationindex(3)thatDCstimulatelymphocytestoproliferatewas1.39±0.375.Conclusion:IhePBMCfromCHBpatientscou
5、ldbeinducedintoDC.TestingthephenotypeandthecapacityofstimulatingleukocyteofDCfromCHBcanbeknowntheabilityofantiviralimmunity.KeywordsDendriticcell；ChronichepatitisB；Immuniticsituation機(jī)體特異性免疫反應(yīng)的產(chǎn)生，是由抗原提呈細(xì)胞(APC)捕獲抗原，在其對(duì)抗原處理后將抗原信息提呈T、B淋巴細(xì)胞后引發(fā)的。樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcell,DC)是功能最強(qiáng)大的專(zhuān)職的抗原提呈細(xì)胞，在機(jī)體的免疫反應(yīng)屮起著重要作用［1,2
6、］。HBV持續(xù)感染與多方面因索有關(guān)，其屮患者DC功能低下，抗原提呈能力下降，不能正常誘導(dǎo)機(jī)體抗HBV免疫反應(yīng)是最重要因素之一。HBV持續(xù)感染患者僅產(chǎn)生弱的HBV特異的細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞反應(yīng)(CILs),導(dǎo)致HBV病毒不能清除和慢性乙型肝炎的遷延不愈。檢測(cè)和通過(guò)治療改善患者的DC功能在乙肝免疫治療屮有重要意義。本實(shí)驗(yàn)擬建立從人外周血分離培養(yǎng)DC及檢測(cè)其表型與誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖能力的方法，并對(duì)HBV感染的慢性肝炎患者體內(nèi)DC功能進(jìn)行了檢測(cè)。1材料與方法1.1病例選擇選擇慢性乙型病毒肝炎10例，男7例，女3例，年齡18歲?50歲，血清內(nèi)氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)在69U/L-515U/L,平均值為182U/
7、L,6個(gè)月內(nèi)均未使用過(guò)抗病毒藥物,所有病例參照2005年慢性乙型肝炎防治指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］。7名健康志愿者作為正常對(duì)照。1.2主要試劑RPM11640培養(yǎng)基為GIBCO公司產(chǎn)品。rhGM-CSF.rhlL-4.rhlNF-a購(gòu)自晶美公司，為Peprotech公司產(chǎn)詁。MTT、絲裂霉素C、HEPESL■谷氨酰胺為9gma公司產(chǎn)品。PE熒光標(biāo)記鼠抗人HLA-DR.CD80、CD86單抗為美國(guó)BD公司產(chǎn)品。淋巴細(xì)
