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《新型鴨呼腸孤病毒RT-PCR檢測(cè)方法建立與初步應(yīng)用-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、·24·試驗(yàn)研究廣東畜牧獸醫(yī)科技2014年(第39卷)第1期新型鴨呼腸孤病毒RT—PCR檢測(cè)方法建立與初步應(yīng)用孔豐，袁遠(yuǎn)華，肖成謀。，黃淑堅(jiān)貅(1．遂溪縣遂城畜牧獸醫(yī)站，廣東湛江524300；2．大瀝鎮(zhèn)農(nóng)林服務(wù)中心，廣東佛山528231；3．佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，廣東佛山528231)摘要：為建立一種能夠快速檢測(cè)新型鴨呼腸孤病毒(NDRV)的方法，本研究參考GenBank上登錄的NDRVs3基因保守序列設(shè)計(jì)特異性引物經(jīng)條件優(yōu)化后，建立了檢測(cè)NDRV的RT-PCR方法。對(duì)其特異性、敏感性和重復(fù)性進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果顯示：該方法僅能從NDRV分
2、離毒中擴(kuò)增到與預(yù)期大小相符，長(zhǎng)度為298bp的特異性目的片段，檢測(cè)靈敏度達(dá)到83．4Pg病毒RNA；而其它病毒：番鴨呼腸孤病毒、禽呼腸孤病毒、鴨病毒性肝炎病毒、鴨瘟病毒、鴨新城疫病毒和禽流感病毒等樣品的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。采用該方法對(duì)在廣東不同地區(qū)采集的15份鴨病料樣品進(jìn)行檢測(cè)，NDRV陽(yáng)性率為53．33％。表明建立的RT-PCR方法特異性強(qiáng)、敏感度高，可用于NDRV的l臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查。關(guān)鍵詞：新型鴨呼腸孤病毒；RT-PCR；檢測(cè)中圖分類號(hào)：$852．659．4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1005—8567(2014)O1—0024—04E
3、stablishmentandApplicationofRT—PCRMethodforDetectionofNDRVKongFeng，YuanYuanhua，XiaoChengmou，HuangSh~ian3(1．SuichengAnimalHusbandryandVeterinaryMedicineStation，SuixiCounty，Zhanjiang524300，China；2．DaliTownAgriculturalServiceCenter，F(xiàn)oshan528231，China；3．CollegeofLifeScience，F(xiàn)os
4、hanUniversity，F(xiàn)oshan528231，China)Abslract：Todevelopamethodfordetectionofnew—typeduckreovirus(NORV)，aRT—PCRmethodwasestablishedwith1paksofspecificprimersdesignedbasedontheconservedsequencesofS3geneofNDRV．RT—PCRresultsshowedthata298bpspecificalfragmentcouldbedetectedonlyfromt
5、heRNAofNDRV—QYstrain,andthesensitivityofRT—PCRreachedto83．4PgNDRVRNA．FifteentissuesamplesofsickducksfromdiferentareasofGuangdongprovinceweredetectedrespectivelybytheRT—PCRandthepositiveratewas53．33％(8／15)forNDRVwhichindicatedthattheRT—PCRmethodfordetectingNDRVwasrapid,speci
6、ficandsensitive，andcouldbeusedinclinicdiganoses．Keywords．New—typeduckreovims；RT—PCRdetection新型鴨呼腸孤病毒(New-typeduckre—前該病的診斷只能采用病毒分離和血清學(xué)方法。但ovirus，NDRV)病，是一種以肝臟不規(guī)則壞死、出血這些方法繁瑣、費(fèi)時(shí)，不適用于本病的快速診斷[6]。斑／點(diǎn)和心肌、腔上囊出血為主要特征的新疫病，王劭等吲研究證實(shí)NDRVs3基因存在一個(gè)變異區(qū)其發(fā)病率和病死率差異較大，但患病鴨日齡愈小，(390~975nt)。因此，本
7、實(shí)驗(yàn)根據(jù)已發(fā)表的NDRV發(fā)病率、病死率愈高。本病最早由陳少鶯等報(bào)道f1]。NP03株S3基因序列(GenBank登錄號(hào)：GQ888710)隨后在我國(guó)各地也報(bào)道了此病，并從感染組織中設(shè)計(jì)了1對(duì)特異引物，建立了針對(duì)新型鴨呼腸孤分離到病毒q]。2005年冬季以來(lái)，該病在福建、廣病毒S3基因的RT—PCR檢測(cè)方法，為臨床快速診東、浙江、安徽等地番鴨、半番鴨、北京鴨、麻鴨群斷及分子流行病學(xué)調(diào)查提供有效手段。中相繼暴發(fā)。因該病病因不明，缺乏有效的防治措1材料與方法施而迅速蔓延，極大地威脅著養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展_5]。目1．1病毒、病料及禽胚收稿日期：2013-1
8、2—26：通訊作者新型鴨呼腸孤病毒RT-PCR檢測(cè)方法建立與初步應(yīng)用一孔豐，等試驗(yàn)研究·25·新型鴨呼腸孤病毒(NDRV—QY)、鴨病毒性肝30s，72oC延伸30
