β-欖香烯抗肝癌的促凋亡機(jī)制研究-論文.pdf

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1、世界科學(xué)技術(shù)一中醫(yī)藥現(xiàn)代化★中醫(yī)研究／[；一欖香烯抗肝癌的促凋亡機(jī)制研究六歐陽(yáng)俊，沈洪，，劉軍樓2，劉亞軍一，谷靜(1．南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院南京210029；2．江蘇省中醫(yī)院南京210029)摘要：目的：研究中藥莪術(shù)提取物一欖香烯對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡，以及小鼠肝癌H22荷瘤小鼠凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的作用。方法：體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細(xì)胞，MrlT法檢測(cè)一欖香烯對(duì)細(xì)胞增殖的影響，AnnexinV—FITC／PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡。通過建立H22小鼠肝癌荷瘤模型，觀察一欖香烯對(duì)荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果：盧一欖香烯對(duì)HepG2細(xì)胞具有抑制增殖的作

2、用，呈劑量和時(shí)間的依賴性；AnnexinV—FITC／PI法檢測(cè)到早期凋亡細(xì)胞。不同實(shí)驗(yàn)組對(duì)荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用程度不同，各藥物濃度組Caspase一3蛋白均上調(diào)(P

3、MPI一1640培養(yǎng)液(WISENT每年約有6千萬人確診為此病【1J。目前臨床治療該公司，批號(hào)：350000一CL)，胎牛血清(Hyclone公司，病主要方法為手術(shù)、化療和放療，但這些治療方法MYB0814)，MTY試劑盒、AnnexinV—FITC細(xì)胞凋亡會(huì)帶來嚴(yán)重的不良反應(yīng)，因此迫切需要一種低毒副檢測(cè)試劑盒(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司，批號(hào)作用的藥物。一欖香烯是從中藥莪術(shù)中提取的有效分別為：KGA311，KGA106)，一actin(ABCAM公司，批抗癌藥物，其為非細(xì)胞毒性的抗腫瘤藥物，能明顯號(hào)：#4970)，一抗NF—KBP65、Caspase一3、辣根過氧化抑制腫瘤細(xì)胞的增殖[2

4、1，其通過阻止腫瘤細(xì)胞的細(xì)物酶(HRP)標(biāo)記的二抗(CellSignaling公司，批號(hào)分別胞周期并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡來實(shí)現(xiàn)【3J。筆者通過觀察為#8242，#9665，#707492)，BCA蛋白定量試劑盒(碧一欖香烯對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2及小鼠肝癌H22細(xì)胞云天公司，批號(hào)：P10010S)，Marker、ECL發(fā)光盒(，nle卜的增殖抑制及凋亡情況，為進(jìn)一步證實(shí)一欖香烯通mo公司)，PVDF膜(Millipore公司)。過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)抗腫瘤提供參考依據(jù)。1．2動(dòng)物與細(xì)胞株昆明小鼠，雄性，體質(zhì)量l4—16g(中國(guó)人民解1材料放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，動(dòng)物許可證1．1試劑號(hào)：S

5、CXK一(軍)2007—004；HepG2細(xì)胞株(東南大學(xué)一欖香烯乳(大連華立金港藥業(yè)有限公司，國(guó)免疫實(shí)驗(yàn)室饋贈(zèng))；小鼠肝癌H22細(xì)胞株(購(gòu)自ATCC北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院)。收稿日期：2013—12—08修回日期：2014一O1一O4★江蘇省中醫(yī)藥管理局領(lǐng)軍人才培養(yǎng)資助項(xiàng)目(LJ200901)：黃芪多糖及屆一欖香烯提高消化系腫瘤細(xì)胞免疫原性并增強(qiáng)免疫應(yīng)答的機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：沈洪；江蘇省中醫(yī)院院級(jí)課題資助項(xiàng)目(Y11004)：通過PI3K／PKB信號(hào)傳導(dǎo)途徑上調(diào)自噬活性進(jìn)而增強(qiáng)腫瘤抗原提呈能力的13一欖香烯抗肝癌免疫機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：沈洪，劉亞軍?！铩锿ㄓ嵶髡撸荷蚝?，教授，主任醫(yī)師，博士

6、生導(dǎo)師，主要研究方向：消化系疾病的中醫(yī)藥防治及機(jī)制研究。(WorldScienceandTechnology~odernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedwa]7382014第十六卷第四期*Vo1．16No．41．3儀器2．4一欖香烯乳對(duì)昆明荷瘤小鼠的影響細(xì)胞超凈臺(tái)(蘇州市華寧凈化設(shè)備有限公司，通過腹腔注射H22細(xì)胞懸液，在昆明小鼠體內(nèi)型號(hào)：BSC一1300一Ⅱ一B1)；恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱(SANYO傳代H22細(xì)胞，6天后抽取小鼠腹水，以1500rpm公司，型號(hào)：MCO一15AC)；低速臺(tái)式離心機(jī)(北京京離心5min，調(diào)整細(xì)胞密度為1

7、．0x106個(gè)／mL，注射細(xì)立離心機(jī)有限公司，型號(hào)：LD24—1．2)；流式細(xì)胞儀胞懸液0．2mL至昆明小鼠右腋皮下，全程嚴(yán)格無及分析軟件；垂直電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀(Bio—Rad公司)。菌操作。將40只荷瘤小鼠隨機(jī)分為4組，每組lO以上實(shí)驗(yàn)儀器由南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院只，分別為模型組，一欖香烯低、中、高劑量組。造模臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中心提供。24h后，根據(jù)小鼠的體質(zhì)量，接受為期14天的灌胃治療：一欖香烯高劑量