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1、黃芪皂苷的提取與純化1.黃芪的有效成分黃芪化學(xué)成分的研究，始于上世紀50年代初期，迄今為止，已從黃芪類中藥中分離出了幾十種活性成分。經(jīng)藥理學(xué)研究表明：黃芪主要含有黃芪皂甙類、黃芪多糖類、黃酮類、氨基酸類及少量微量元素類。肖容等人對黃芪中氨基酸進行了提取，得到15種氨基酸并測出其含量。根據(jù)日本、前蘇聯(lián)和中國學(xué)者的研究，黃芪中的黃酮或黃酮類似物約二十種左右，大多屬于黃酮，異黃酮和異黃烷類化合物，從黃芪中分離的黃酮具有抗缺血和改善血相作用，是天然抗氧化劑家族中的重要成員之一，它具有很強的清除自由基和抑制脂質(zhì)過氧化特性。黃芪中主要的有效成分為黃
2、芪皂甙和黃芪多糖。2.黃芪皂甙2.1皂甙的分類及性質(zhì)皂甙是由皂甙元和糖組成，依據(jù)甙元的結(jié)構(gòu)將皂甙分為兩大類，其一為甾體皂甙，另一類為三萜皂甙。甾體皂甙結(jié)構(gòu)中大多不含羧基而呈中性，而三萜皂甙根據(jù)水解后結(jié)構(gòu)分成四環(huán)三萜皂甙和五環(huán)三萜皂甙兩大類，結(jié)構(gòu)中可見羧基，因此酸性皂甙多屬此類。黃芪中含有大量的皂甙類及三萜類化合物，約有50多種左右，它們大多屬于四環(huán)三萜類，其中含量較多的為黃芪皂甙Ⅳ，即黃芪皂甙甲苷。皂甙的溶解度隨其分子中連接糖數(shù)目不同而不同。一般可溶于水，易溶于熱水、熱甲醇及熱乙醇，不溶于乙醚等極性小的有機溶劑，具有溶血作用，可被酶或酸
3、溶液水解，水解后的糖多為葡萄糖、半乳糖、鼠李糖及其他五碳糖。2.2皂甙的提取(1)正丁醇萃取法皂甙在水飽和正丁醇或戊醇中溶解度大，且能與水分成兩相，可利用此性質(zhì)從皂甙水溶液中用丁醇或戊醇提取皂甙，與親水性大的糖、蛋白質(zhì)等分離。具體方法用親水性強的正丁醇為溶劑在水溶液中作兩相萃取，皂甙轉(zhuǎn)溶于正丁醇，一些親水性強的雜質(zhì)如糖、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等仍留在水中，與皂甙分離。(2)甲醇提取-乙醚沉淀法甲醇提取含皂甙植物，過濾，回收絕大部分甲醇，冷卻甲醇濃縮液，利用皂甙不溶于乙醚的特性，加入等體積的乙醚，搖勻，析出大量白色沉淀，靜置，傾出上清液，再加入乙醚
4、，又有白色沉淀產(chǎn)生，如此重復(fù)，直到加入乙醚無沉淀產(chǎn)生為止。把沉淀物干燥，得黃色粗皂甙，如其純度不合要求，可以再溶于甲醇，加乙醚沉淀。此法流程簡單，能耗少，易于操作，但溶劑消耗量大。(3)水提取-無水乙醇溶解法水提取皂甙，過濾，濃縮，真空干燥，粉碎，得棕色粗皂甙。利用皂甙可溶于熱無水乙醇，而糖類、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)不溶原理，采用熱無水乙醇把粗皂甙粉中的皂甙溶解出來，回收部分乙醇，冷卻，靜置，即有大量的白色皂甙析出。此法所得的皂甙純度很高，但溶劑和電能消耗大，皂甙得率不高。(4)大孔樹脂法用水或醇類提取皂甙去雜后，用少量水溶解粗皂甙，上大孔樹脂柱
5、，先用水沖洗柱子，乙醇洗脫，皂甙主要被60-80%乙醇洗脫出來，收集這部分的洗脫液，濃縮至干，得精制皂甙，淡黃色。大孔樹脂對物質(zhì)的吸附是以范德華力為主的，非極性分子形式的雜質(zhì)容易被吸附，而且樹脂內(nèi)部具有很多大小適當(dāng)?shù)目籽?，在一定程度上可以依照分子量的大小進行分離。分離過程中，一些無機鹽，低分子量的糖在大孔樹脂中由于極性的原因不被吸附而容易被水洗脫。蛋白質(zhì)、中分子量及大分子量的多糖類被低濃度的乙醇除去。通過大孔樹脂后，已經(jīng)得到純度較高、質(zhì)感較好的皂甙。此法不僅操作簡單，成本低，回收率大，而且連續(xù)化程度高，適宜工業(yè)化生產(chǎn)。(5)重金屬鹽沉淀
6、法皂甙的水溶液可以和一些金屬鹽類如鉛鹽、鋇鹽、銅鹽等產(chǎn)生沉淀，利用這一性質(zhì)可以進行皂甙的提取分離。但此法會有重金屬殘留，對人體有害，而且所得的皂甙純度也不高，需配合其它方法進一步提純，故很少采用。(6)超臨界CO2萃取超臨界流體萃取(SupercriticalFluidExtraction)技術(shù)是近30年來發(fā)展起來的一項新型萃取和分離技術(shù)。超臨界流體(簡稱SF)具有和液體相近的密度，其粘度與氣體相近，擴散系數(shù)為液體10-100倍，因此對許多物質(zhì)有較好的滲透性和較強的溶解能力。但是不同植物的皂甙在分子量和極性上有比較大的差別，究竟此法能否
7、適應(yīng)所有的皂甙，還有待研究。A索氏提取法:分別采用95％乙醇、70％乙醇和30％乙醇進行索氏提取器提取，提取溶劑體積為350ml，提取時間為4小時。B超聲波法:采用95％乙醇進行超聲波提取黃芪皂甙，提取溶劑體積為350ml，超聲時間為30min。C煎煮回流法:分別采用醇堿提取法、水提取法和堿水提取法進行回流提取實驗，提取溶劑體積為350ml，提取時間為2小時。1.將飲片用中藥粉碎機粉碎到適合提取的粒度。2去除雜質(zhì):使用7.5倍的丙酮和石油醚為1:1的溶液在功率為100％的條件下進行超聲處理。3過濾，黃芪樣品中的有機溶劑揮發(fā)風(fēng)干，用于提取
8、實驗。4提取:稱取適量上述操作后所得黃芪干粉，置于圓底燒瓶中或索氏提取器中，按一定料液比、浸提溫度和浸提時間等提取條件，在熱水浴中回流浸提數(shù)小時，冷卻后離心，收集上清液備用。5濾渣復(fù)提:將初次浸提殘渣，按前
