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《實(shí)驗(yàn)三 線粒體和液泡系的超活染色與觀察.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、實(shí)驗(yàn)三線粒體和液泡系的超活染色與觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、觀察動(dòng)、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體、液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布。二、學(xué)習(xí)一些細(xì)胞器的超活染色技術(shù)。實(shí)驗(yàn)原理活體染色是指對(duì)生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色但又無(wú)毒害的一種染色方法。它的目的是顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)胞舶死亡。活染技術(shù)可用來(lái)研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。根據(jù)所用染色劑的性質(zhì)和染色方法的不同，通常把活體染色分為體內(nèi)活染與體外活染兩類。體內(nèi)活染是以膠體狀的染料溶液注入動(dòng)、植物體內(nèi)，染料的膠粒固定、
2、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)里，達(dá)到易于識(shí)別的目的。體外活染又稱超活染色，它是由活的動(dòng)、植物分離出部分細(xì)胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色。活體染料之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是染料的“電化學(xué)，，特性起重要作用。堿性染料的膠粒表面帶陽(yáng)離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽(yáng)離子，這樣，它們彼此之間就發(fā)生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作為活體染色劑之用，應(yīng)選擇那些對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性或毒性極小的染料，而且總是要配成稀淡的溶液來(lái)使用。一般是以
3、堿性染料最為適用，可能因?yàn)樗哂腥芙庠陬愔|(zhì)(如卵磷脂、膽固醇等)的特性，易于被細(xì)胞吸收。詹納斯綠B（JanusgreenB）和中性紅（neutralred）兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對(duì)于線粒體和液泡系的染色各有專一性。實(shí)驗(yàn)用品一、器材顯微鏡、恒溫水浴鍋、解剖盤、剪刀、鑷子、雙面刀、載玻片、凹面載玻片、表面皿、吸管、牙簽、吸水紙。二、試劑1．Ringer溶液氯化鈉0.85g(變溫動(dòng)物用0.65g)氯化鉀0.25g氯化鈣0.03g蒸餾水100ml2.10％、1／3000中性紅溶液稱取0.5g中性紅溶
4、于50mlRinger液，稍加熱(30~40'C)使之很快溶解，用濾紙過(guò)濾，裝入棕色瓶于暗處保存，否則易氧化沉淀，失去染色能力。臨用前，取已配制的1％中性紅溶液lml，加入29mlRinger溶液混勻，裝入棕色瓶備用。3．1％、1/5000詹納斯綠B溶液稱取50mg詹納斯綠B溶于5mlRinger溶液中，稍加微熱(30～40℃)，使之溶解，用濾紙過(guò)濾后，即為1％原液。取1％原液lml加入49mlRinger溶液，即成1/5000工作液裝入瓶中備用。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。三、材料1.小白鼠肝細(xì)胞。
5、2.人口腔上皮細(xì)胞。3.洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞。4.蟾蜍胸骨劍突軟骨細(xì)胞。5.小麥或黃豆幼根根尖。實(shí)驗(yàn)方法一、線粒體的超活染色與觀察線粒體是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場(chǎng)所，其形態(tài)和數(shù)量隨不同物種、不同組織器官和不同的生理狀態(tài)而發(fā)生變化。詹納斯綠B是毒性較小的堿性染料，可專一性地對(duì)線粒體進(jìn)行超活染色，這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))，呈藍(lán)綠色；而線粒體面圍的細(xì)胞質(zhì)中，這些染料被還原為無(wú)色的色基(即無(wú)色狀態(tài))。(一)人口腔粘膜上皮細(xì)胞線粒體的超活染色觀察1.取清潔載玻片放在37℃恒
6、溫水浴鍋的金屬板上，滴2滴1/5000詹納斯綠B染液。2.實(shí)驗(yàn)者用牙簽寬頭在自己口腔頰粘膜處稍用力刮取上皮細(xì)胞，將刮下的粘液狀物放入載玻片的染液滴中，染色10～15min(注意不可使染液干燥，必要時(shí)可再加滴染液)，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去四周溢出的染液，置顯微鏡下觀察。3.在低倍鏡下，選擇平展的口腔上皮細(xì)胞，換高倍鏡或油鏡進(jìn)行觀察?？梢姳馄綘钌掀ぜ?xì)胞的核周圍胞質(zhì)中，分布著一些被染成藍(lán)綠色的顆粒狀或短棒狀的結(jié)構(gòu)，即是線粒體。(二)小白鼠肝細(xì)胞線粒體的超活染色觀察1.用頸椎脫臼法處死小白鼠，置于解剖盤中，剪開腹腔，
7、取小白鼠肝邊緣較薄的肝組織一小塊，放入表面皿內(nèi)。用吸管吸取Ringer液，反復(fù)浸泡沖洗肝臟，洗去血液。。2.在干凈的凹面載玻片的凹穴中，滴加]／5000詹納綠B溶液，再將肝組織塊移人染液，注意不可將組織塊完全淹沒，要使組織塊上面部分半露在染液外，這樣細(xì)胞內(nèi)的線粒體酶系可充分得到氧化，易被染色。當(dāng)組織塊邊緣被染成藍(lán)綠色即成(一般需染20~30min)。3.吸去染液，滴加Ringer溶液，用眼科剪將組織塊著色部分剪碎，使細(xì)胞或細(xì)胞群散出。然后，用吸管吸取分離出的細(xì)胞懸液，滴一滴于載玻片上，蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察。4.在
8、低倍鏡下選擇不重疊的肝細(xì)胞，在高倍鏡或油鏡下觀察，可見具有1～2個(gè)核的肝細(xì)胞質(zhì)中，有許多被染成藍(lán)綠色的線粒體，注意其形態(tài)和分布狀況。(三)洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞線粒體的超活染色觀察1.用吸管吸取1/5000詹納斯綠B染液，滴一滴于干凈的載玻片上，然后，撕取一小片洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，置于染液中，染色10～15min。2.用吸管吸去染液，加一滴Ringer液．注意使內(nèi)表皮組織展平，蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察
