呼吸道病毒的微生物學(xué)檢驗(yàn)ppt課件

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1、1呼吸道標(biāo)本的微生物檢查21.鼻咽拭子采集時(shí)，患者用清水漱口，對(duì)光而坐，頭向上仰張大口，用壓舌板輕壓舌根，取無菌鼻咽拭子繞過懸雍垂，在鼻咽腔、懸雍垂后側(cè)反復(fù)涂抹數(shù)次小心取出，避免接觸口腔部其他組織。2．咽拭子將拭子用無菌生理鹽水濕潤，用壓舌板輕壓舌根，暴露整個(gè)口咽部。先用拭子輕擦扁桃體表面后棄去，再取1支濕潤的拭子輕壓扁桃體，擦取擠壓出的分泌物，或擦取偽膜等病變部位。標(biāo)本的采集33.痰液標(biāo)本自然咳痰法：受檢者用清水溯口數(shù)次后，用力咳嗽自氣管深部將痰咳出吐至無菌容器中。對(duì)痰量少或無痰等咳痰困難者，可霧化吸

2、入45℃左右的10%氯化鈉水溶液，使痰容易排出。對(duì)于幼兒，可輕輕壓迫胸骨上部氣管，使其咳嗽而取之。標(biāo)本的采集4血平板巧克力平板中國藍(lán)平板鼻咽拭子直接涂片染色檢查革蘭染色異染顆粒初步報(bào)告白喉棒狀桿菌培養(yǎng)菌落形態(tài)、涂片染色初步報(bào)告生化反應(yīng)、血清學(xué)鑒定檢驗(yàn)程序常規(guī)培養(yǎng)百日咳桿菌培養(yǎng)血清斜面培養(yǎng)基雞蛋培養(yǎng)基鮑-金培養(yǎng)基亞碲酸鉀血平板純培養(yǎng)菌落形態(tài)、涂片染色5血平板巧克力平板中國藍(lán)平板普通培養(yǎng)普通培養(yǎng)普通培養(yǎng)35℃、18~24h35℃、18~24h35℃、18~24h痰液標(biāo)本肉眼觀察涂片染色觀察初步報(bào)告培養(yǎng)前處理

3、菌落形態(tài)和涂片染色生化反應(yīng)、血清學(xué)鑒定報(bào)告檢驗(yàn)程序61、肉眼觀察：下呼吸道標(biāo)本為痰液，選取膿血性的痰液用于細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)。異常惡臭的膿性痰，常見于肺膿瘍患者，而且可能與厭氧菌有關(guān)。痰液中有顆粒狀、菌塊和干酪樣物質(zhì)可能與放線菌病和曲霉菌感染有關(guān)。痰液標(biāo)本檢驗(yàn)操作流程72、涂片檢查：挑選痰液中膿、血性部分涂片，干燥固定后，進(jìn)行革蘭染色鏡檢。如發(fā)現(xiàn)形態(tài)典型、有特殊結(jié)構(gòu)，初步可以確定所屬菌屬或種的細(xì)菌，可直接報(bào)告。如查見革蘭陽性葡萄狀排列的球菌，可報(bào)告“痰液涂片查見革蘭陽性球菌，形似葡萄狀”；痰液標(biāo)本檢驗(yàn)操作流程8

4、如查見革蘭陽性雙球菌、矛頭狀、有明顯莢膜時(shí)，可報(bào)告“痰液涂片查見革蘭陽性雙球菌，形似肺炎球菌”。如不能直接確定菌屬或種的細(xì)菌，可報(bào)告“痰液涂片查見革蘭×性×菌”。如果痰片中均為鱗狀上皮細(xì)胞，則應(yīng)視為不合格標(biāo)本。痰液標(biāo)本檢驗(yàn)操作流程93.分離培養(yǎng)取經(jīng)過前處理的痰液標(biāo)本分別接種血平板、巧克力平板和中國藍(lán)平板。巧克力平板置5%—10%CO2環(huán)境培養(yǎng)，其他平板于普通環(huán)境35℃孵育18—24h。根據(jù)菌落形態(tài)，細(xì)菌染色觀察，進(jìn)一步進(jìn)行鑒定。痰液標(biāo)本檢驗(yàn)操作流程10特殊菌的培養(yǎng)1.結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：無菌吸管加前處理標(biāo)

5、本2-3滴于羅-琴培養(yǎng)基35℃孵育至8周，每周觀察一次；2.嗜肺軍團(tuán)菌培養(yǎng)：取氣管分泌物接種于活性炭酵母瓊脂(CYE)或費(fèi)-高(F-G)平板，35℃、2.5%CO2培養(yǎng)，每天用肉眼觀察，直至第14天；3.百日咳鮑特菌的培養(yǎng)：將標(biāo)本直接接種在鮑-金培養(yǎng)基上，置有蓋的玻璃缸（缸內(nèi)加少量的水，并在水中加少許硫酸銅，防止細(xì)菌及霉菌生長）中，35℃孵育3—5天。114.白喉棒狀桿菌培養(yǎng)：將標(biāo)本接種于血清斜面或雞蛋培養(yǎng)基，35℃孵育8-10h觀察；5.流感嗜血桿菌培養(yǎng)：將標(biāo)本接種于血平板和巧克力平板，并在平板中央接

6、種一直線金黃色葡萄球菌（或四角點(diǎn)種），35℃、5%-10%CO2環(huán)境孵育18-24h。6.腦膜炎奈瑟菌培養(yǎng)：將鼻煙拭子接種于已保溫在350C的卵黃雙抗平板上，35℃、5%-10%CO2環(huán)境孵育18—24h。特殊菌的培養(yǎng)12結(jié)果報(bào)告1.如發(fā)現(xiàn)可疑致病菌落，則進(jìn)行涂片染色觀察、生化反應(yīng)及血清學(xué)鑒定得出報(bào)告“檢出xx細(xì)菌，并報(bào)告該菌在培養(yǎng)基中的大慨比例”；2.如無致病菌落生長，則繼續(xù)培養(yǎng)至48h，平板上均為咽部正常菌群生長，無可疑致病菌落生長，則報(bào)告“正常菌群生長”；3.如雖在平板上未發(fā)現(xiàn)特定的致病菌，但某種

7、常居菌比正常情況明顯增多或近似純培養(yǎng)，考慮可能菌群失調(diào)或菌群交替癥，也可進(jìn)行鑒定后報(bào)告“xx菌純培養(yǎng)”或“xx菌生長旺盛”。13注意事項(xiàng)1.上呼吸道標(biāo)本要及時(shí)送檢，防止干燥。采集時(shí)盡量避免正常菌群的污染。2.痰液標(biāo)本最好采取晨痰。3.上呼吸道有大量的正常菌群，正常情況下這些細(xì)菌并不致病，但在機(jī)體抵抗力下降或某些因素作用下，可以侵入下呼吸道致病。特別是在抗生素作用下或在大量正常菌群掩蓋下，致病菌難以檢出。