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《一株高效褐藻膠降解菌的篩選及其性質(zhì)的初步研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、一株高效褐藻膠降解菌的篩選及其性質(zhì)的初步研究王麗娟展長(zhǎng)淑孫彥粉王振杰（山東大學(xué)威海分校海洋學(xué)院，山東威海264209）摘要：從威海近海天然腐爛的海帶中分離得到10株褐藻膠降解菌。以海藻酸鈉為唯一碳源，通過馴化培養(yǎng)、初篩、復(fù)篩得到一株優(yōu)勢(shì)菌。本課題對(duì)該優(yōu)勢(shì)菌的最適生長(zhǎng)條件及最適產(chǎn)酶條件進(jìn)行研究，并對(duì)其酶的性質(zhì)做了初步研究。關(guān)鍵詞：褐藻膠降解菌；篩選；最適生長(zhǎng)條件：最適產(chǎn)酶條件：降解酶性質(zhì)Abstract:10algindegradingbacteriawereisolatedfromnaturaldecayingkelpofWeihaioffshor
2、e.Adominantbacteriahasgotthroughdomestication,screening,andrescreenedusingAlginateasasolesourceofcarbon.Intheissuewestudiedaboutthedominantbacteria,soptimalgrowthconditionsandtheconditionsforenzymeproduction,andalsoapreliminarystudyahoutthenatureofitsactivity.Keywords:Algindeg
3、radingbacteria;Screening;Theoptimumgrowthconditions;enzymeproductionconditions;Enzymenature褐藻膠(algin)是褐藻細(xì)胞壁的填充物質(zhì)，是一種由α-D-甘露糖醛酸和β-L-古羅糖醛酸兩種單糖組成的線形多糖[1]。褐藻膠應(yīng)用廣泛，但其相對(duì)分子質(zhì)量較大，導(dǎo)致其溶解度較低，溶液粘性較大，應(yīng)用受到很大限制。近年來，褐藻膠寡糖生物活性的研究取得了重大進(jìn)展，如調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)、誘導(dǎo)植物抗病能力、抗腫瘤及抗老年癡呆，以及防治海洋無脊椎動(dòng)物常見病的功能等[2]。因而通過各種降解方
4、法制備的褐藻膠寡糖在糖化學(xué)、糖生物學(xué)、糖工程及糖類藥物研究領(lǐng)域具重要的研究?jī)r(jià)值。目前褐藻膠寡糖的獲取方法主要有物理降解法、酸降解法，氧化降解法和酶解法等。其中酶解法是一種條件溫和、可控性強(qiáng)和特異性高的生物降解方法，是目前的主要研究方向[3]。因此褐藻膠降解酶具有重要的開發(fā)價(jià)值和研究意義。本項(xiàng)目的研究重點(diǎn)在于利用微生物得到降解酶并最終獲得寡糖，通過誘導(dǎo)篩選出產(chǎn)酶量高、酶活性強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)菌株，確定出其最適生長(zhǎng)條件和最適產(chǎn)酶條件，并對(duì)降解酶的性質(zhì)做出初步研究。1．材料與方法1．1材料1．1．1樣品采集腐爛海帶采集于山東省威海市近海1．1．2培養(yǎng)基成分初篩培養(yǎng)
5、基（g/L）：海藻酸鈉10；硝酸鉀1.0；氯化鈉15；磷酸氫二鉀0.5；硫酸鎂0.5；硫酸亞鐵0.01；瓊脂15-20；水1000mL馴化培養(yǎng)基（g/L）：褐藻酸鈉；氯化鈉15；蛋白胨1.0；磷酸氫二鉀1.0；磷酸二氫鉀1.0；磷酸氫二鈉1.0；硫酸鎂0.5；硫酸亞鐵0.01；水1000mL復(fù)篩及發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L）：褐藻酸鈉10;硫酸銨5.0;磷酸氫鉀2.0;氯化鈉l5；硫酸鎂1.0；硫酸亞鐵0.01；酵母膏1.0;水1000mL保藏培養(yǎng)基（g/L）：牛肉膏5.0；蛋白胨10；磷酸氫二鈉2；氯化鈉5;瓊脂5-7;水1000ml；PH7.4-7.6
6、1．2實(shí)驗(yàn)方法1．2．1菌株的馴化用海水浸泡天然腐爛海帶，制備菌懸液，取1ml菌懸液移入到30ml含海藻酸鈉2g/L的馴化培養(yǎng)基中，同時(shí)觀察培養(yǎng)液的變化，3天后，取1ml馴化液至新鮮馴化培養(yǎng)基中，海藻酸鈉濃度按4、6、8、10g/L逐步提高，共馴化5代。1．2．2菌種的分離取第5代培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后涂布于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上。30。C培養(yǎng)72小時(shí)。待菌落長(zhǎng)好，挑取不同形態(tài)特征的菌落，劃線分離直至得到純化的單菌落。1．2．3菌種的初篩將分離得到的單菌落接于初篩平板上，置30。C培養(yǎng)72小時(shí)后，選取在平板上生長(zhǎng)的菌株，接種到斜面4。C冰箱保藏備用。1
7、．2．4菌種的復(fù)篩1．2．4．1制備液體菌株將30ml發(fā)酵培養(yǎng)基裝入100ml三角燒瓶中，于121.5。C滅菌。挑取一環(huán)新鮮的初篩菌株斜面種子，于28。C搖瓶培養(yǎng)48小時(shí)。1．2．4．2在100ml三角燒瓶中裝入發(fā)酵培養(yǎng)基50ml按2%（體積分?jǐn)?shù)）的接種量接入液體菌種，28。C搖瓶培養(yǎng)72小時(shí)后測(cè)定發(fā)酵培養(yǎng)基中生物量,并用3，5-二硝基水楊酸法酶活。對(duì)菌體用細(xì)胞破碎儀進(jìn)行破壁后再測(cè)酶活。1．2．4．3寡糖含量與生物量的測(cè)定生物量的測(cè)定：用721型分光光度計(jì)為620nm處測(cè)定發(fā)酵液的吸光度值，以空白發(fā)酵培養(yǎng)基作對(duì)照。寡糖含量的測(cè)定：本實(shí)驗(yàn)采用兩種方法
8、測(cè)定寡糖含量。第一，可用3，5-二硝基水楊酸法測(cè)定酶解產(chǎn)物中還原糖的含量。反應(yīng)體系溶液包括，1.0ml1%海藻酸鈉溶液，4
