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1、研究論文中國(guó)蔬菜CHINAVEGETABLES2014(6):20-27基于形態(tài)學(xué)標(biāo)記及SSR標(biāo)記的甜瓜主栽品種分類(lèi)鑒定研究*李瑞峰 高 鵬 朱子成 欒非時(shí)(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院,黑龍江哈爾濱150030)摘 要:利用形態(tài)學(xué)標(biāo)記、SSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)市場(chǎng)上廣泛種植的甜瓜品種進(jìn)行分類(lèi)鑒定。利用形態(tài)學(xué)聚類(lèi)分析,得到60份材料間的相似系數(shù)為0.73~0.94,在相似系數(shù)為0.74處,60份甜瓜材料被分為2類(lèi),為薄皮甜瓜和厚皮甜瓜;在相似系數(shù)為0.77處,薄皮甜瓜按照單果質(zhì)量、熟性、果皮底色、芳香氣分為4組,實(shí)現(xiàn)初步分類(lèi)。經(jīng)過(guò)SSR標(biāo)記聚類(lèi)分析,得到60份材料
2、間的相似系數(shù)為0.75~0.95,當(dāng)相似系數(shù)為0.77時(shí),可以將所有供試材料分為6類(lèi)。利用SSR分子標(biāo)記技術(shù),為60份不同甜瓜品種構(gòu)建唯一的指紋圖譜。18對(duì)SSR引物,每對(duì)引物可以檢測(cè)到4~11條數(shù)目不等的多態(tài)性條帶,平均為8條。多態(tài)性信息含量(PIC)平均為0.71,變化范圍為0.58~0.88。采用QR編碼為60份甜瓜材料構(gòu)建了唯一的指紋圖譜。試驗(yàn)結(jié)果表明形態(tài)學(xué)標(biāo)記對(duì)60份材料實(shí)現(xiàn)初步分類(lèi),SSR分子標(biāo)記則能夠有效地區(qū)別60份材料,并且為建立甜瓜品種的核酸指紋圖譜庫(kù)提供了理論數(shù)據(jù),實(shí)現(xiàn)對(duì)甜瓜品種進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的鑒定。關(guān)鍵詞:甜瓜;形態(tài)學(xué)標(biāo)記;SSR標(biāo)
3、記;聚類(lèi)分析;指紋圖譜自1981年以來(lái),中國(guó)甜瓜產(chǎn)量一直穩(wěn)居世界狀易受環(huán)境影響,因此品種鑒定分類(lèi)不能只靠田間第一,在世界總產(chǎn)量中占據(jù)半壁江山。正是由于我性狀。分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展,為品種鑒定提供了新國(guó)是甜瓜生產(chǎn)和消費(fèi)第一大國(guó),近年來(lái)中國(guó)甜瓜的的途徑(Naitoetal.,2008)。前人已將分子標(biāo)記技市場(chǎng)潛力快速開(kāi)發(fā),每年都有大量的甜瓜新品種涌術(shù)廣泛應(yīng)用于葫蘆科瓜類(lèi)作物,Staub等(2004)入市場(chǎng)。隨著新育成品種的不斷增加,骨干親本的利用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)希臘甜瓜進(jìn)行了多樣重復(fù)使用,新基因資源的缺乏,新育成品種的鑒定性研究;劉萬(wàn)勃等(2002)利用
4、RAPD和ISSR分難度逐漸增大;加之當(dāng)前中國(guó)甜瓜種子市場(chǎng)尚不夠子標(biāo)記技術(shù)對(duì)37份甜瓜種質(zhì)進(jìn)行了遺傳多樣性研規(guī)范,一些單位受商業(yè)利益驅(qū)動(dòng)掩蓋或篡改品種名究;徐志紅等(2008)利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)稱(chēng),導(dǎo)致甜瓜市場(chǎng)材料普遍存在著由于同名異物或31份甜瓜材料遺傳多樣性和親緣關(guān)系進(jìn)行了研究;同物異名現(xiàn)象導(dǎo)致的品種真實(shí)性問(wèn)題(王美榮等,Szabó等(2005)利用SSR技術(shù)對(duì)47份中世紀(jì)甜瓜2010)。為解決甜瓜種子經(jīng)營(yíng)中的糾紛與市場(chǎng)混亂種質(zhì)進(jìn)行了分析;艾呈祥等(2006)在比較分析各問(wèn)題,有必要建立中國(guó)甜瓜品種的核酸指紋庫(kù),為試材圖譜的基
5、礎(chǔ)上,探討了品種指紋圖譜的統(tǒng)計(jì)學(xué)甜瓜品種純度與真實(shí)性的鑒定提供理論依據(jù)和技術(shù)方法,并對(duì)構(gòu)建的2個(gè)甜瓜雜交種的指紋圖譜進(jìn)行支撐,保護(hù)瓜農(nóng)和育種家們的利益。了可信度分析,建立了適于種子檢驗(yàn)中使用的標(biāo)準(zhǔn)由于甜瓜本身類(lèi)型非常豐富,且雜交種表型性SSR標(biāo)記指紋圖譜。宋海斌(2012)利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)471份甜瓜材料進(jìn)行真實(shí)性鑒定,構(gòu)建李瑞峰,女,碩士研究生,專(zhuān)業(yè)方向:甜瓜分子育種,E-mail:SSR指紋代碼,發(fā)現(xiàn)其中52份材料的指紋代碼不lrf0208@163.com具有唯一性。本試驗(yàn)利用形態(tài)學(xué)標(biāo)記對(duì)60份甜瓜*通訊作者(Correspondingaut
6、hor):欒非時(shí),女,教授,博士生導(dǎo)師,材料的12個(gè)表觀性狀進(jìn)行調(diào)查記錄,初步分類(lèi),專(zhuān)業(yè)方向:西甜瓜分子遺傳育種,E-mail:luanfeishi@sina.com同時(shí)利用SSR分子標(biāo)記構(gòu)建指紋圖譜,以期為中國(guó)收稿日期:2014-01-06;接受日期:2014-03-14基金項(xiàng)目:國(guó)家西甜瓜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系—分子育種崗位項(xiàng)目(CARS-26-02)甜瓜指紋圖譜庫(kù)的建立提供理論依據(jù)。—20—《中國(guó)蔬菜》學(xué)術(shù)論文下載www.cnveg.org中國(guó)蔬菜CHINAVEGETABLES研究論文凍,然后置于-80℃冰箱中保存。待果實(shí)成熟時(shí)調(diào)1 材料與方法查12個(gè)
7、生物學(xué)性狀。分子試驗(yàn)在東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園1.1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)藝學(xué)院西甜瓜分子遺傳育種實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行,主要包括試驗(yàn)于2012年3月至2013年10月進(jìn)行。其材料DNA提取、SSR-PCR擴(kuò)增等。中田間試驗(yàn)在東北農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)實(shí)習(xí)基地24號(hào)大1.2 試驗(yàn)材料棚進(jìn)行。將60份甜瓜材料每份取20粒飽滿種子,以60份中國(guó)市場(chǎng)上廣泛種植的甜瓜品種為試經(jīng)過(guò)8h浸種,于28℃培養(yǎng)箱催芽,待80%種子材,包括46份薄皮甜瓜,14份厚皮甜瓜(表1)。出芽時(shí)播種于營(yíng)養(yǎng)缽中,幼苗2~3片真葉時(shí)定植。供試材料分別來(lái)自北京(9份)、甘肅(3份)、河南(2在整枝時(shí)每株摘取幼嫩葉片混勻,放入液
8、氮中速份)、黑龍江(10份)、吉林(23份)、遼寧(