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《土貝母皂苷體外抗乙型肝炎病毒的藥效研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、土貝母皂苷體外抗乙型肝炎病毒的藥效研究作者：周艷萌，吳中明，向曉波【關(guān)鍵詞】土貝母皂苷；,,2．2．15細(xì)胞；,,乙型肝炎病毒；,,體外 摘要：目的觀察土貝母皂苷體外抗乙型肝炎病毒(HBV)效果。方法以2．2．15細(xì)胞為靶細(xì)胞，給藥后通過檢測細(xì)胞表面及培養(yǎng)液中HBsAg，HBeAg和HBVDNA，觀察土貝母皂苷抗HBV效果。結(jié)果土貝母皂苷各濃度組對HBsAg，HBeAg表達(dá)均有抑制作用，但以0.1mg/ml作用48h時最強，分別為43.46%和54.52%（P<0.01）；對HBVDNA的抑制作用以1mg/ml組顯著（P<0.05）。結(jié)論土
2、貝母皂苷在體外有抗乙型肝炎病毒(HBV)作用?！ ￡P(guān)鍵詞：土貝母皂苷；2．2．15細(xì)胞；乙型肝炎病毒；體外 Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofantiHBVactivityinvitro．MethodsTheantiHBVactivityofTubEimosideanhepatocellularcarcinomacellsstablytransfectedosidecouldsignificantlyreduceHBsAg、HBeAglevel.After48hoursofcontinuousexposuretoT
3、ubeimosideattheconcentrationof0.1mg/mlinvitroculture,theinhibitionsofHBsAg，HBeAgg/mlinvitroculture.ConclusionTheantiHBVeffectofTubeimosideisdemonstratedin2．2．15cells． Keyoside；2．2．15cells；HBV；Invitro 乙型肝炎是由嗜肝DNA病毒（HepatitisBvirus,HBV）引起的一種世界范圍內(nèi)的傳染性疾病。目前全世界約有3億多人為慢性HBV感染，我國約占半數(shù)。
4、受HBV慢性感染的人群罹患肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌（Hepatocellularcarcinoma,HCC）的相對危險性至少增加100倍，并最終導(dǎo)致死亡，給人們的健康造成極大的威脅和損害。因此，尋求高效低毒的抗HBV的天然藥物已成為刻不容緩的問題［1，2］。土貝母含有多種化學(xué)成分，具有抗腫瘤、抗病毒、免疫抑制等多種藥理作用［3］。陳英俊等［4］曾用土貝母加入九三三肝泰丸中治療乙型肝炎208例，總有效率為93.4%，說明土貝母在治療乙肝的復(fù)方中起到了一定的作用，但土貝母是否具有抗HBV的作用國內(nèi)外尚未見報道。為了觀察土貝母皂苷對乙型肝炎病毒是否有影響，我們用
5、HBV基因轉(zhuǎn)染的人肝癌細(xì)胞系（HepG2）的2.2.15細(xì)胞體外培養(yǎng)作工具，檢測土貝母皂苷在體外對乙型肝炎病毒的作用。現(xiàn)將實驗結(jié)果報告如下。 1.材料與方法 1.1材料2.2.15細(xì)胞系HBV（adl，轉(zhuǎn)接種于6孔、96孔培養(yǎng)板及25ml培養(yǎng)瓶中。培養(yǎng)4d后換含不同濃度（10，5，1，0.1，0.01mg/ml）的土貝母皂苷培養(yǎng)液，分別作用24，48，72h。每24h換液1次，共培養(yǎng)72h，換出的上清及收集的細(xì)胞置20℃保存?zhèn)錅y。以相同條件不含藥物培養(yǎng)液和陽性對照藥物(拉米夫定)培養(yǎng)液培養(yǎng)的細(xì)胞作為對照?？瞻卓撞患蛹?xì)胞，只加培養(yǎng)液?！ ?.2.2藥物
6、對細(xì)胞的毒性實驗用MTT比色分析法［6］檢測細(xì)胞吸光度值，與相應(yīng)對照孔的吸光度值（存活細(xì)胞100）比較，按公式計算存活細(xì)胞的百分比，對細(xì)胞毒性進(jìn)行動態(tài)觀察。細(xì)胞存活率=（實驗孔OD值/對照孔OD值）×100?！ ?.2.3藥物對2.2.15細(xì)胞HBsAg，HBeAg和HBcAg的影響細(xì)胞爬片：用間接免疫熒光法［7］進(jìn)行染色，于熒光顯微鏡下觀察，以胞膜或核膜呈黃綠色熒光者為陽性。流式細(xì)胞儀（FACSCalibur）檢測：上機前細(xì)胞懸液用PBS液200ml重懸，F(xiàn)ITC受激發(fā)后發(fā)出黃綠色熒光，設(shè)定氬離子激發(fā)光源為488nm，用CellQuest軟件采集細(xì)胞2
7、0000個再進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以單參數(shù)直方圖表示?！ ?.2.4藥物作用后細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBsAg，HBeAg和HBVDNA的檢測HBsAg、HBeAg的檢測：用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA法）分別檢測每孔HBsAg，HBeAg的P/N值，操作按試劑盒說明書進(jìn)行，根據(jù)公式計算抑制率：某藥對HBsAg或HBeAg的抑制率=［（對照組平均P/N藥物處理組平均P/N）/對照組平均P/N］×100［8］上清中HBVDNA的檢測：實時熒光定量PCR法操作按試劑盒說明書進(jìn)行，結(jié)果以Ct值表示?！ ?.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS10.0軟件，配對t檢驗?！ ?結(jié)果 2.1
8、藥物的細(xì)胞毒性實驗在加入不同濃度的土貝母皂苷和3TC作用24，48h及72h后，
