代謝型谷氨酸受體在大鼠糖尿病神經(jīng)病理性疼痛中的作用

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1、代謝型谷氨酸受體在大鼠糖尿病神經(jīng)病理性疼痛中的作用:柯昌斌黃曉霞1羅向紅李清劉菊英【摘要】目的評價代謝型谷氨酸受體(mGluR5)在大鼠糖尿病神經(jīng)病理性疼痛中的作用。方法3月齡組),另取32只正常大鼠作為對照組(C組,n=32)。M組腹腔注射mGluR5拮抗劑20mg/kg,1次/d,C、D組注射等體積生理鹽水。各組分別于第2、4、6、8周(T1~4)末隨機(jī)取8只大鼠,采用vonFrey纖維絲測定雙后足機(jī)械縮足反應(yīng)閾值(M組T1~4時Methods96PEP(selectivemGluR5inhib

2、itor)+DNP.Diabetesmellitus(DM)g/kg.Bloodglucoseleveleasuredeveryedbybloodglucoselevel≥16.0mmol/Linthe4thentstimulation(M組),另取32只正常大鼠作為對照組(C組,n=32)。模型制備成功后每周一上午M組腹腔注射mGluR5拮抗劑2甲基6苯基乙炔嘧啶(MPEP)20mg/kg,1次/d,C、D組注射等體積生理鹽水,直至處死大鼠?! ?.3M510型激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察陽性

3、反應(yīng)。  1.5mGluR5mRNA檢測RTPCR檢測mGluR5mRNA水平每100mg組織加入Trizol1ml用玻璃勻漿器勻漿,室溫放置10min,加入200μl氯仿,12000r/min離心10min;取上清加入500μl異丙醇,12000r/min離心10min后棄上清;加入75%乙醇1ml洗滌沉淀,5000r/min離心5min后棄上清;冰上干燥RNA沉淀8min后用DEPC水溶解。用紫外分光光度儀測定RNA的濃度;用1.5%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳,通過成像系統(tǒng)檢測提取RNA的完整性。用P

4、rimerpremier5.0軟件設(shè)計引物,mGluR5上游引物:5′GTCAGTCTCCTGATGTCAAGTGG3′,下游引物:5′TTTTCACAGAGGCCTGCATAGCCTG3′;βactin上游引物:5′GTCACCAACTGGGACGATATG3′,下游引物:5′GCCTGGATGGCTACGTACATG3′。PCR反應(yīng)條件:94℃10min預(yù)變性,94℃30s、55℃30s、72℃30s,循環(huán)35次,72℃延伸7min。mGluR5和βactin同時擴(kuò)增,條件相

5、同。取上述mGluR5和βActinPCR產(chǎn)物進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳,用凝膠成像系統(tǒng)和凝膠分析系統(tǒng)進(jìn)行PCR產(chǎn)物掃描和半定量分析,采用目標(biāo)條帶積分光密度值與內(nèi)參βactin條帶積分光密度值的比值表示mGluR5mRNA的表達(dá)相對水平。  1.6統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析,計量資料以x±s表示,組間及組內(nèi)比較采用單因素方差分析?! ?.3RTPCR結(jié)果與C組比較,D組T1~4時M組T1~4時MPEP是mGluR5的特異性拮抗劑,可以竟?fàn)幮越Y(jié)合阻斷了興奮性氨基酸與mGluR5

6、的結(jié)合,受體激活減少而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。在神經(jīng)系統(tǒng)的物理損傷、缺血再灌注損傷以及應(yīng)激損傷中表現(xiàn)出明顯的神經(jīng)保護(hù)作用;在甲醛試驗、角叉菜膠疼痛模型和脊神經(jīng)結(jié)扎和脊髓損傷以及炎性疼痛等模型中有治療慢性傷害性疼痛的作用。在實驗中觀察到,MPEP處理明顯緩解了疼痛的癥狀,且隨著時間的延長,大鼠MPEP對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛有明顯的治療作用。由于MPEP是通過的特異性拮抗mGluR5而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng),MPEP的應(yīng)用可明顯抑制糖尿病神經(jīng)病理性疼痛,因此,糖尿病引起脊髓后角mGluR5的高表達(dá)及高度的激活在糖尿病神

7、經(jīng)病理性疼痛的產(chǎn)生和維持中有重要作用。這為糖尿病神經(jīng)病理性疼痛的治療提供了新思路,可以從mGluR5的轉(zhuǎn)錄水平到受體的活化過程對糖尿病時各種傷害性信息向初級中樞的傳遞過程進(jìn)行調(diào)控,以尋找最佳的治療方法?! 【C上所述,糖尿病引起大鼠脊髓后角mGluR5的高表達(dá)和過度活化,導(dǎo)致各種傷害性信息向初級中樞的傳遞過程的易化和放大,同時興奮性谷氨酸釋放增加導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)的毒性損傷共同作用的是糖尿病神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生和發(fā)展的重要環(huán)節(jié)?!緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1ZieglerD.Treatmentofdiabeticneuro

8、pathyandneuropathicpain〔J〕.DiabetesCare,2008;31(2):25561.  2ChenSR,PanHL.DistinctrolesofgroupⅢmetabotropicglutamatereceptorsincontrolofnociceptionanddorsalhornneuronsinnormalandnerveinjuredrats〔J〕.JPharmacolExpTher,2005;312(1):1206. 

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