代謝型谷氨酸受體在大鼠糖尿病神經(jīng)病理性疼痛中的作用

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1、代謝型谷氨酸受體在大鼠糖尿病神經(jīng)病理性疼痛中的作用：柯昌斌黃曉霞1羅向紅李清劉菊英【摘要】目的評(píng)價(jià)代謝型谷氨酸受體(mGluR5)在大鼠糖尿病神經(jīng)病理性疼痛中的作用。方法3月齡組)，另取32只正常大鼠作為對(duì)照組(C組，n=32)。M組腹腔注射mGluR5拮抗劑20mg/kg，1次/d，C、D組注射等體積生理鹽水。各組分別于第2、4、6、8周(T1～4)末隨機(jī)取8只大鼠，采用vonFrey纖維絲測(cè)定雙后足機(jī)械縮足反應(yīng)閾值(M組T1～4時(shí)Methods96PEP(selectivemGluR5inhib

2、itor)+DNP.Diabetesmellitus(DM)g/kg.Bloodglucoseleveleasuredeveryedbybloodglucoselevel≥16.0mmol/Linthe4thentstimulation(M組)，另取32只正常大鼠作為對(duì)照組(C組，n=32)。模型制備成功后每周一上午M組腹腔注射mGluR5拮抗劑2甲基6苯基乙炔嘧啶(MPEP)20mg/kg，1次/d，C、D組注射等體積生理鹽水，直至處死大鼠。　　1.3M510型激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察陽(yáng)性

3、反應(yīng)。　　1.5mGluR5mRNA檢測(cè)RTPCR檢測(cè)mGluR5mRNA水平每100mg組織加入Trizol1ml用玻璃勻漿器勻漿,室溫放置10min,加入200μl氯仿，12000r/min離心10min;取上清加入500μl異丙醇，12000r/min離心10min后棄上清;加入75%乙醇1ml洗滌沉淀，5000r/min離心5min后棄上清;冰上干燥RNA沉淀8min后用DEPC水溶解。用紫外分光光度儀測(cè)定RNA的濃度;用1.5%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳,通過(guò)成像系統(tǒng)檢測(cè)提取RNA的完整性。用P

4、rimerpremier5.0軟件設(shè)計(jì)引物，mGluR5上游引物:5′GTCAGTCTCCTGATGTCAAGTGG3′,下游引物：5′TTTTCACAGAGGCCTGCATAGCCTG3′;βactin上游引物：5′GTCACCAACTGGGACGATATG3′,下游引物：5′GCCTGGATGGCTACGTACATG3′。PCR反應(yīng)條件：94℃10min預(yù)變性，94℃30s、55℃30s、72℃30s,循環(huán)35次，72℃延伸7min。mGluR5和βactin同時(shí)擴(kuò)增,條件相

5、同。取上述mGluR5和βActinPCR產(chǎn)物進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳,用凝膠成像系統(tǒng)和凝膠分析系統(tǒng)進(jìn)行PCR產(chǎn)物掃描和半定量分析,采用目標(biāo)條帶積分光密度值與內(nèi)參βactin條帶積分光密度值的比值表示mGluR5mRNA的表達(dá)相對(duì)水平?！　?.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x±s表示，組間及組內(nèi)比較采用單因素方差分析?！　?.3RTPCR結(jié)果與C組比較，D組T1～4時(shí)M組T1～4時(shí)MPEP是mGluR5的特異性拮抗劑，可以竟?fàn)幮越Y(jié)合阻斷了興奮性氨基酸與mGluR5

6、的結(jié)合，受體激活減少而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。在神經(jīng)系統(tǒng)的物理?yè)p傷、缺血再灌注損傷以及應(yīng)激損傷中表現(xiàn)出明顯的神經(jīng)保護(hù)作用;在甲醛試驗(yàn)、角叉菜膠疼痛模型和脊神經(jīng)結(jié)扎和脊髓損傷以及炎性疼痛等模型中有治療慢性傷害性疼痛的作用。在實(shí)驗(yàn)中觀察到，MPEP處理明顯緩解了疼痛的癥狀，且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠MPEP對(duì)糖尿病神經(jīng)病理性疼痛有明顯的治療作用。由于MPEP是通過(guò)的特異性拮抗mGluR5而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，MPEP的應(yīng)用可明顯抑制糖尿病神經(jīng)病理性疼痛，因此，糖尿病引起脊髓后角mGluR5的高表達(dá)及高度的激活在糖尿病神

7、經(jīng)病理性疼痛的產(chǎn)生和維持中有重要作用。這為糖尿病神經(jīng)病理性疼痛的治療提供了新思路，可以從mGluR5的轉(zhuǎn)錄水平到受體的活化過(guò)程對(duì)糖尿病時(shí)各種傷害性信息向初級(jí)中樞的傳遞過(guò)程進(jìn)行調(diào)控，以尋找最佳的治療方法?！　【C上所述，糖尿病引起大鼠脊髓后角mGluR5的高表達(dá)和過(guò)度活化，導(dǎo)致各種傷害性信息向初級(jí)中樞的傳遞過(guò)程的易化和放大，同時(shí)興奮性谷氨酸釋放增加導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)的毒性損傷共同作用的是糖尿病神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生和發(fā)展的重要環(huán)節(jié)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】　1ZieglerD.Treatmentofdiabeticneuro

8、pathyandneuropathicpain〔J〕.DiabetesCare，2008;31(2):25561.　　2ChenSR,PanHL.DistinctrolesofgroupⅢmetabotropicglutamatereceptorsincontrolofnociceptionanddorsalhornneuronsinnormalandnerveinjuredrats〔J〕.JPharmacolExpTher,2005;312(1):1206.