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1、蒜氨酸+蒜酶共同作用對環(huán)磷酰胺處理小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用論文陳鋒，顧丹今，陳堅(jiān)，許晏【摘要】目的觀察蒜氨酸+蒜酶對環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用。方法環(huán)磷酰胺造模法制作免疫抑制小鼠模型，給藥10d，測定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率、血清溶血素、脾淋巴細(xì)胞增殖功能及血清IL-2含量，觀察蒜氨酸+蒜酶對小鼠免疫功能的影響。結(jié)果與模型組比較，蒜氨酸+蒜酶在中、高劑量可明顯提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率.freelgarliconimmunologicalfunctioninimmunosuppressivemodelmi
2、cecausedbycyclophosphamide.MethodsTheISmodelinNIHmiceide:Miceinisteredacrophare,serumhemolysinconcentration,thespleenlymphcellstransformationandthelevelofIL-2inserumeasured.ResultsTheresultsshoiddleandhighdosecouldcauseasignificantincreaseofthephagocyticrate,theproliferat
3、ionofspleenocyteesandtheserumhemolysin,alliin+alliinaseathighdosecouldincreasethelevelofIL-2.ConclusionAlliin+alliinasecanstimulatetheimmunologicfunctionofISmiceKeyide;Immunologicalfunction大蒜是百合科蔥屬多年生草本植物，作為藥食兩用歷史悠久?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明大蒜主要具有抗感染、抗腫瘤和防治心腦血管疾病等3大功效。目前公認(rèn)大蒜的生物活性成分主要是蒜酶（all
4、iinase)催化蒜氨酸產(chǎn)生的大蒜辣素(allicin)、阿霍烯(ajoene)等系列含硫有機(jī)化合物［1］。大蒜的抗腫瘤作用與其免疫調(diào)節(jié)作用有關(guān)。大蒜不同制劑對機(jī)體免疫功能的影響已有廣泛報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究了蒜氨酸+蒜酶對環(huán)磷酰胺所致免疫受抑小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用。1材料1.1動物NIH小鼠，(20±2)g，雌雄兼用，購自新疆醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心。1.2藥物蒜氨酸及蒜酶單體由新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院采用新疆地產(chǎn)大蒜提取并純化。蒜氨酸與蒜酶以2∶1比例經(jīng)雙蒸水混合,35℃水浴反應(yīng)30min，形成純品大蒜辣素(稱做蒜氨酸+蒜酶)，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定(1
5、25+63)，(250+125)，(500+250)mg·kg-1等低、中、高3個(gè)劑量。1.3試劑環(huán)磷酰胺(CP)購自上海華聯(lián)制藥有限公司;綿羊紅細(xì)胞懸液(SRBC):由新疆醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供。Alsever's血球保存液:按常規(guī)配制。都氏試劑:NaHCO31.0g，K0.05g，高鐵氰化鉀0.2g，加水至1L。4℃保存。豚鼠補(bǔ)體:多個(gè)豚鼠心臟采血，分離血清，混合。按血清:綿羊紅細(xì)胞=20∶1的比例加入壓積SRBC中，4℃放置20min。2000r/min，離心10min，吸取上清液，生理鹽水稀釋8倍。2方法2.1分組隨機(jī)將50只N
6、IH小鼠分成蒜氨酸+蒜酶(低，中，高劑量)劑量組及正常對照組和模型組，共5組，每組10只。正常對照組每日用生理鹽水(20mg·kg-1)灌胃，共10d；模型組每日用生理鹽水(20mg·kg-1)灌胃，共10d，并在第7天開始同時(shí)腹腔注射環(huán)磷酰胺(17.5mg·kg-1)，共4d；各給藥組分別用不同劑量的蒜氨酸+蒜酶給相應(yīng)各組小鼠灌胃，持續(xù)10d，并在第7天開始同時(shí)腹腔注射環(huán)磷酰胺(17.5mg·kg-1)，共計(jì)4d。第11天測定各項(xiàng)免疫指標(biāo)。2.2小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的測定［2］小鼠腹腔注射1%雞紅細(xì)胞，1ml/只；30min后，再腹
7、腔注射生理鹽水1ml/只，斷頸處死小鼠，吸取腹腔液、涂片，1∶1丙酮甲醇固定5min，Gimesa染色，油鏡觀察。每份標(biāo)本油鏡下觀察200個(gè)巨噬細(xì)胞，計(jì)算吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞百分率。吞噬率（%）=(吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/200個(gè)巨噬細(xì)胞)×100%。2.3對小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響應(yīng)用MTT法［3，4］。處死小鼠用75%酒精浸泡5min，無菌操作取脾,置hank's液中于200目網(wǎng)中研磨,用完全1640培養(yǎng)液配成5×106/ml細(xì)胞懸液。每份標(biāo)本設(shè)3個(gè)平行孔。每孔加100μl細(xì)胞懸液和100μlConA/LPS，并設(shè)細(xì)胞對照。37℃,
8、5%CO2孵育68h，加MTT(5mg/ml)20μl/孔。繼續(xù)培養(yǎng)3h,離心,1500rm/min，5min，棄上清，每孔加100μl二甲基亞砜(DMSO)振蕩15min，于酶標(biāo)儀570nm
