復(fù)方HD對環(huán)磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影響

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1、分類號：R967單位代碼：10159密級：公開學(xué)號：201420652碩士學(xué)位論文中文題目：復(fù)方HD對環(huán)磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影響英文題目：ImmunomoduLatoryeffectsofFuFangHDoncyclophosphamide-inducedimmunosuppressioninmice論文作者：呂歡指導(dǎo)教師：姜明燕教授學(xué)科專業(yè)：藥物分析學(xué)完成時間：2018年3月中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文復(fù)方HD對環(huán)磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影響ImmunomodulatoryeffectsofFuFangHDoncyclophosphamide-inducedimmu

2、nosuppressioninmice論文作者呂歡指導(dǎo)教師姜明燕教授申請學(xué)位醫(yī)學(xué)碩士培養(yǎng)單位第一臨床學(xué)院一級學(xué)科藥學(xué)二級學(xué)科藥物分析學(xué)研究方向中藥免疫藥理學(xué)論文起止時間2016年3月—2018年3月論文完成時間2018年3月中國醫(yī)科大學(xué)（遼寧）2018年5月I中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：本論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，論文中除加以標(biāo)注的內(nèi)容外，不包含其他人或機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含本人為獲得其他學(xué)位而使用過的成果。對本研究提供貢獻(xiàn)的其他個人和集體均已在文中進(jìn)行了明確的說明并表示謝意。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人

3、承擔(dān)。論文作者簽名：日期：年月日中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的原件、復(fù)印件和電子版，允許學(xué)位論文被查閱和借閱。本人授權(quán)中國醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。保密（），在年后解密適用本授權(quán)書。（保密：請在括號內(nèi)劃“√”）論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期年月日日期：年月日II中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要目的：復(fù)方HD作為經(jīng)典的免疫調(diào)節(jié)經(jīng)驗方劑，具有多年臨床應(yīng)用經(jīng)驗，表現(xiàn)出顯著的免疫調(diào)節(jié)作用。但由

4、于中藥復(fù)方制劑的成分較多，作用途徑復(fù)雜，免疫調(diào)節(jié)的機(jī)理不明確以及是否存在毒性等原因，使其難以讓世人信服。因此本研究進(jìn)行了復(fù)方HD的急性毒性試驗以考察復(fù)方HD的安全性，并通過腹腔注射環(huán)磷酰胺造免疫抑制小鼠模型，灌胃給予復(fù)方HD，通過測定相關(guān)免疫指標(biāo)，探究復(fù)方HD發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的機(jī)制。研究方法：實驗一：40只ICR小鼠，6-8周齡，隨機(jī)分為正常對照組和急毒試驗組，每組20只，雌雄各半。由于復(fù)方HD所含的中藥各組份臨床應(yīng)用廣泛，無明顯毒副作用，且急毒預(yù)實驗結(jié)果未見明顯毒性反應(yīng)，因此，進(jìn)行最大給藥量試驗，即以最大灌胃體積0.4mL/10g，最大給藥濃度2.093g/mL，24小時內(nèi)給藥

5、2次，間隔8小時，連續(xù)觀察14天，記錄動物的體質(zhì)量變化及反應(yīng)情況。于第15天小鼠摘眼球取血，采用微板法進(jìn)行血漿谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AlanineAminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AspartateAminotransferase，AST）測定；肌氨酸氧化酶法進(jìn)行血肌酐（Creatinine，CRE）檢測；脲酶法進(jìn)行血尿素氮（BloodUreaNitrogen，BUN）檢測，考察復(fù)方HD對于肝腎功能的影響，并測定主要器官臟器指數(shù)，若器官有明顯肉眼可見改變則進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。實驗二：雄性ICR小鼠48只，6-8周齡，隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、香菇多糖陽性對照組、

6、復(fù)方HD低劑量組、復(fù)方HD中劑量組和復(fù)方HD高劑量組，每組8只，分別以蒸餾水、蒸餾水、香菇多糖（200mg/kg）、復(fù)方HD（5g/kg、10g/kg、20g/kg）每日一次灌胃，連續(xù)10天；在第4-6天腹腔注射環(huán)磷酰胺（40mg/kg）建立免疫抑制小鼠模型。第11天處死小鼠，測定其脾指數(shù)、胸腺指數(shù)，器官指數(shù)=器官質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（g）；流式細(xì)胞儀檢測CD3+、CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞進(jìn)行T細(xì)胞亞群分析；ELISA法檢測血漿IFN-γ和IL-4細(xì)胞因子水平；實時熒光定量PCR法檢測脾臟轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果：實驗一：1、急毒試驗組小鼠和正常

7、對照組小鼠連續(xù)觀察14天，狀態(tài)正常，無死亡，并且兩組小鼠的時間-體重變化曲線接近于平行，分析比較兩組小鼠第7天和第14天體重，無統(tǒng)計學(xué)差異，P＞0.05。2、兩組小鼠的心、肝、III中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文脾、肺、腎主要器官的臟器指數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異，P＞0.05，并且解剖小鼠未見器官有明顯肉眼可見改變。3、兩組小鼠血漿AST、ALT、CRE、BUN水平均無統(tǒng)計學(xué)差異，P＞0.05。實驗二：1、與正常對照組小鼠相比，模型對照組小鼠的體重明顯降低；胸腺指數(shù)明顯下降P＜0.05；CD3+