健脾養(yǎng)榮片對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫功能低下小鼠的保護(hù)作用論文

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1、健脾養(yǎng)榮片對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫功能低下小鼠的保護(hù)作用論文.freelg/kg腹腔注射復(fù)制小鼠免疫低下模型，至第9天檢測(cè)各組小鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、碳粒廓清實(shí)驗(yàn)、骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、脾指數(shù)和脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)?！窘Y(jié)果】健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組和鯊肝醇組小鼠白細(xì)胞數(shù)顯著高于模型組（P＜0.01）；健脾養(yǎng)榮片中劑量組白細(xì)胞數(shù)與鯊肝醇組比較顯著升高（P＜0.05）。健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組廓清指數(shù)K顯著升高（P＜0.05）.freelg/mL；鯊肝醇片由廣東市橋制藥廠（番禺）生產(chǎn)（批號(hào)：051209），用蒸餾水溶解，稀釋成2.75mg/mL；健脾養(yǎng)榮片水煎劑由廣州

2、中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院購(gòu)得飲片，用蒸餾水水煎濃縮，配制成濃度0.20、0.40、0.80g/mL；中華墨汁由北京一得閣制，使用時(shí)先高速離心去其下層液，再低速離心去其上清液，將中層液用生理鹽水配成濃度為250g/L的墨汁；RPMI1640培養(yǎng)基為Gibco公司產(chǎn)品；脂多糖（LPS）、T細(xì)胞絲裂源刀豆蛋白A（ConA）、二甲基噻唑二苯基四唑溴鹽（MTT）均為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品。1.3儀器722分光光度計(jì)由上海儀器分析二廠生產(chǎn)；CX21奧林巴斯光學(xué)顯微鏡由日本奧林巴斯公司生產(chǎn)。1.4造模［2］、分組給藥NIH小鼠60只，在動(dòng)物房適應(yīng)飼養(yǎng)3d后，

3、將小鼠隨機(jī)分為6組：正常組，模型組，健脾養(yǎng)榮片低、中、高劑量組（劑量分別為4、8、16g·kg-1·d-1），鯊肝醇組（劑量為0.055g·kg-1·d-1），每組各10只。正常組按常規(guī)方法喂養(yǎng)，其他組小鼠均灌胃給予相應(yīng)藥液4d，于第5天腹腔注射0.2g/kg環(huán)磷酰胺1次，然后繼續(xù)灌胃給藥4d。1.5小鼠血白細(xì)胞計(jì)數(shù)各組于實(shí)驗(yàn)第1天（給藥前）、第5天、末次給藥（第9天）后1h分別于眼眶靜脈叢取血測(cè)定白細(xì)胞。每次取血20μL，吹入盛有0.38mL白細(xì)胞稀釋液的試管中，搖勻，將蓋玻片放在白細(xì)胞計(jì)數(shù)板正中，充液，靜置2～3min，計(jì)數(shù)白細(xì)胞，數(shù)4角大

4、方格的白細(xì)胞總數(shù)，×50即為白細(xì)胞數(shù)/mm3，再×106即轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)單位×109·L-1。1.6小鼠碳粒廓清試驗(yàn)［3］157于末次給藥后1h尾靜脈注入250g/L中華墨汁10mL/kg，于注射后1、5min用吸管分別從眼球后靜脈叢取血20μL，溶于1g/LNa2CO32mL溶液中搖勻，置分光光度計(jì)在波長(zhǎng)675nm下比色，測(cè)定光密度（D）。將小鼠頸椎脫臼處死，稱(chēng)取體質(zhì)量，取出小鼠肝臟、脾臟，分別稱(chēng)肝脾質(zhì)量。按下列公式計(jì)算廓清指數(shù)K或校正廓清指數(shù)a：K=（LogD1-LogD2）/（t2-t1）;a=3K×mbody/（m肝+m脾）其中，D1、D2

5、為不同時(shí)間所取血的光密度；t2-t1為取2份血樣的時(shí)間差。1.7小鼠骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)［5］253于末次給藥后1h，頸椎脫臼處死小鼠，剝離股骨，取右肢股骨，用體積分?jǐn)?shù)3%的醋酸10mL沖出骨髓內(nèi)細(xì)胞，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)4個(gè)大方格的細(xì)胞數(shù)，所得數(shù)×2.5×104，即為一根股骨中的骨髓有核細(xì)胞數(shù)。1.8小鼠脾指數(shù)實(shí)驗(yàn)、脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)小鼠活殺后，分別取出各組小鼠的脾臟，用扭力天平稱(chēng)質(zhì)量，所得值×100/體質(zhì)量為脾指數(shù)（I脾）。取出脾臟后，無(wú)菌制成脾細(xì)胞懸液，并配制成5×106/mL，加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100μL，再分別加入完全RPMI1

6、640+ConA（5μg/mL）溶液或LPS（20μg/mL）溶液各100μL，置孵箱中培養(yǎng)72h，終止培養(yǎng)前4h摻入MMT，20μL/孔，培養(yǎng)終止時(shí)，先輕輕吸出上清，每孔再加入100μL細(xì)胞裂解液，過(guò)夜培養(yǎng)以充分溶解MMT，最后于酶標(biāo)儀570nm處測(cè)D值。1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2結(jié)果2.1各組小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)表1結(jié)果顯示，第1天和第5天時(shí)各組小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。第9天經(jīng)環(huán)磷酰胺處理后，模型組白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著低于正常組（P＜0.01）；健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組和鯊肝醇組小鼠白細(xì)胞數(shù)

7、與模型組比較顯著升高（P＜0.01），而健脾養(yǎng)榮片低劑量組則無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組和鯊肝醇組白細(xì)胞計(jì)數(shù)與健脾養(yǎng)榮片低劑量組比較顯著升高（P＜0.01）；健脾養(yǎng)榮片中劑量組白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于鯊肝醇組（P＜0.05）。2.2各組小鼠骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、脾指數(shù)比較表2結(jié)果顯示，模型組與正常組比較，骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、脾指數(shù)均顯著降低（P＜0.01）；健脾養(yǎng)榮片中劑量組與模型組比較，骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著升高（P＜0.01），且高于健脾養(yǎng)榮片低劑量組與鯊肝醇組（P＜0.05），但健脾養(yǎng)榮片高劑組與模型組比較無(wú)顯著性差異（P＞0.

8、05）。健脾養(yǎng)榮片中劑量組和鯊肝醇組脾指數(shù)均高于模型組（P＜0.05），健脾養(yǎng)榮片低、高劑量組與模型組比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；健脾養(yǎng)榮片中、