環(huán)磷酰胺對小鼠免疫抑制的動物模型建立及其免疫功能的測定.doc

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1、環(huán)磷酰胺對小鼠免疫抑制的動物模型建立摘要:[目的]建立環(huán)磷酰胺對小鼠的免疫抑制的動物模型，從天然免疫功能和獲得免疫功能兩方面檢測對小鼠的影響。[方法]初次免疫設(shè)立實驗組給予OVA-AL(OH)3(0.5/只)和對照組給予NS（0.5/只）；8d,10d,12d,14d分別給實驗組和對照組注射NS和CTX(100mg/kg);與15d加強(qiáng)免疫分別注射NS和OVA-AL(OH)3(0.5/只)；22d檢測免疫功能[結(jié)果]與NS-NS組相比，CTX-NS組的SI值，雙向免疫及ELISA的效價無明顯差別，但吞噬細(xì)胞指數(shù)及吞噬細(xì)胞百分率明顯降低；與NS-OVA相比C

2、TX-OVA組的SI明顯降低，雙向免疫劑ELISA效價都降低[結(jié)論]環(huán)磷酰胺對小鼠的T淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞以及吞噬細(xì)胞有抑制作用Abstract:[aims]Toestablishanimalmodelofcyclophosphamideinmiceimmunosuppression,testinmicefromtwoaspectsofnaturalimmunefunctionandimmunityfunction[methods]PrimaryimmunetosetuptheexperimentalgroupgivenOVA-AL(OH)3andThec

3、ontrolgroupgivenNS;the8th,10th,12th,14thdaygivetheexperimentalgroupNSandthecontrolgroupCTX,andthe15thstrengthentheimmune;the22thtesttheimmunefunction[results]ComparedwithNS-NSgroup,theSIvalueofCTX-NSgroup,bidirectionalimmunepotencyandELISAhasnoobviousdifference,butthephagocyteinde

4、xandphagocytespercentagedecreasedobviously;ComparedwithNS-OVACTX-SIofOVAgroupwasobviouslylower,bidirectionalimmuneagentELISAtiterwerereduced[conclusion]CyclophosphamideinmiceofTlymphocyte,Blymphocyteandphagocyteshaveinhibition關(guān)鍵詞：環(huán)磷酰胺CTX免疫抑制動物模型淋巴細(xì)胞建立一種環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠模型，并將其與正常小鼠進(jìn)行對照，通過

5、檢測小鼠的天然及獲得免疫功能對比其改變與不同，從而可知環(huán)磷酰胺對免疫抑制的作用，有利于進(jìn)一步進(jìn)行對臨床應(yīng)用抗腫瘤的研究。1.材料與方法1.1材料1.11實驗動物：ICR小鼠4只，雌性，20~22g，清潔級，吉林大學(xué)實驗動物中心。1.12重要器材：顯微鏡，離心機(jī)，超凈臺，細(xì)胞計數(shù)板，細(xì)胞培養(yǎng)箱，酶標(biāo)儀，打孔器，加樣器（200μl,20μl），酶標(biāo)板，EP管1.13實驗試劑：CTX(山西普德藥業(yè)公司)，生理鹽水（NS），OVA+AL(OH)3，苦味酸，培養(yǎng)液（IMDM）5%FCS,ConA(10μg/ml),MTT(5μg/ml),白細(xì)胞計數(shù)液（2%冰醋酸），

6、二甲亞砜（DMSO）,1.5%瓊脂，PBS，洗液（PBS-Tween20），封閉液BSA（0.5%~1%的牛血清白蛋白），酶標(biāo)抗體（HRP-GaM）,顯色底物，終止液，3%雞紅細(xì)胞懸浮液，3%淀粉溶液，Giemsa-wright’s染液1.2方法1.21小鼠模型的建立：初次免疫設(shè)立實驗組給予OVA-AL(OH)3(0.5/只)和對照組給予NS（0.5/只）；8d,10d,12d,14d分別給實驗組和對照組注射NS和CTX(100mg/kg);與15d加強(qiáng)免疫分別注射NS和OVA-AL(OH)3(0.5/只)；22d檢測免疫功能1.22T淋巴細(xì)胞功能檢測（M

7、TT法）實驗動物摘眼球取血后無菌操作取脾臟和胸腺，制備單細(xì)胞懸液，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，調(diào)細(xì)胞濃度至1x107/ml,培養(yǎng)48小時，加入MTT，繼續(xù)培養(yǎng)2小時，小心吸取上清，加入DMSO震蕩是顆粒溶解，用酶標(biāo)儀測定吸光度值A(chǔ)570nm，結(jié)果測量：用酶標(biāo)儀測定光密度值A(chǔ)570nm（用空白孔調(diào)零），記錄結(jié)果。結(jié)果判定：SI(刺激指數(shù))=ConA刺激孔A值/對照組A值1.23B淋巴細(xì)胞功能檢測雙向免疫擴(kuò)散法：實驗動物摘眼球取血，分離血清。制備瓊脂糖凝膠后進(jìn)行鋪膠，待瓊脂糖凝固后與載玻片上打梅花孔。將血清倍比稀釋，稀釋度為1:2,1:4,1:8,1:16.與梅花孔中央加入

8、Ag（OVA0.1mg/ml）,周圍的孔依次按順序加入生理鹽水，1