血晶素誘導(dǎo)ho1表達(dá)增加及對(duì)急性肺損傷小鼠mmp2、mmp9 mrna的影響的論文

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1、血晶素誘導(dǎo)HO1表達(dá)增加及對(duì)急性肺損傷小鼠MMP2、MMP9mRNA的影響的論文血晶素誘導(dǎo)ho1表達(dá)增加及對(duì)急性肺損傷小鼠mmp2、mmp9mrna的影響【關(guān)鍵詞】ho1;急性肺損傷;mmp2;mmp9【摘要】目的通過(guò)復(fù)制急性肺損傷模型，探討血晶素誘導(dǎo)血紅素加氧酶1(hemeoxygenase1，ho1)的表達(dá)對(duì)于小鼠急性肺損傷的影響。方法利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和蛋白質(zhì)印跡方法檢測(cè)急性肺損傷小鼠肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrixmetalloproteinas2，mmp2)、

2、mmp9mrna和ho1蛋白的表達(dá)。結(jié)果血晶素加脂多糖組和對(duì)照組比較，ho1蛋白表達(dá)明顯增高(p<0.05);脂多糖組與對(duì)照組比較，mmp2mrna和mmp9mrna表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，血晶素加脂多糖組與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。結(jié)論ho1降低了急性肺損傷小鼠肺組織mmp2、mmp9mrna的表達(dá)，對(duì)于小鼠的急性肺損傷有保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】ho1;急性肺損傷;mmp2;mmp9　expressionofhemin-inducedho

3、1anditseffectsonmmp2mrna,mmp9mrnainmicein-induced(hemeoxygenase1)ho1onmiceodelofacutelunginjury.methodsthertpcrandethodsatrixmetalloproteinase2(mmp2),mmp9mrnaandho1inmicein+lpsgroupmp2mrnaandmmp9mrnabetmp2mrnaandmmp9mrnabetin+lpsgroupgroupandc

4、ontrolgroup(p>0.05).conclusionho1candomp2andmmp9mrnainmiceice.　　【keymp2;mmp9　　血紅素加氧酶(hemeoxygenase,ho)是血紅素代謝過(guò)程中的起始酶和限速酶，可以降解血紅素。.在人和哺乳動(dòng)物體內(nèi)共有3種ho的同工酶：ho1、ho2、ho3。其中ho1為誘導(dǎo)型，又稱為熱休克蛋白32，研究發(fā)現(xiàn)血晶素可以誘導(dǎo)ho1的高表達(dá)[1]。急性肺損傷(acutelunginjury,ali)是以肺血管內(nèi)皮細(xì)胞及肺泡上皮

5、細(xì)胞廣泛損傷為病理特征的一種失控的炎性反應(yīng)，是全身炎性反應(yīng)綜合征所致多器官功能障礙綜合征的肺部表現(xiàn)。本研究通過(guò)復(fù)制脂多糖(lipopolysaccharide，lps)誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠模型，檢測(cè)血晶素誘導(dǎo)ho1的高表達(dá)對(duì)肺組織中基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrixmetalloproteinas2，mmp2)、mmp9mrna的影響，為臨床ali的防治提供理論依據(jù)?！　?材料與方法　　1.1材料　　1.1.1試劑：lps和血晶素為sigma公司產(chǎn)品;trizol試劑為invitrogen公司產(chǎn)品;re

6、versetranscriptionsystem和gotaqgreenmastermix均為promega公司產(chǎn)品;dnamaker為北京天根生化科技有限公司產(chǎn)品;兔抗鼠ho1多克隆抗體美國(guó)santacruz公司產(chǎn)品。　　1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性balb/c小鼠(清潔級(jí))40只，10～12周齡，體重19～22g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供?！　?.2方法　　1.2.1實(shí)驗(yàn)分組與給藥方法：隨機(jī)分為4組：對(duì)照組、脂多糖組、血晶素加脂多糖組和血晶素組，每組10只。脂多糖組：腹腔注射脂多糖，20mg/kg;血晶素加脂

7、多糖組：腹腔注射脂多糖前2h給予血晶素，30mg/kg;血晶素組：腹腔注射血晶素，30mg/kg;對(duì)照組：在相同時(shí)間點(diǎn)注射等體積的0.9%氯化鈉溶液?！　?.2.2肺組織ho1蛋白表達(dá)的in離心15min，吸取上清，分裝。應(yīng)用考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度檢測(cè)，其余置-80℃保存。每組取50μg樣品蛋白行8%sds聚丙烯酰胺凝膠電泳后，采用水浴式電印跡方法轉(zhuǎn)膜，電壓90v轉(zhuǎn)膜3h。取出pvdf膜，應(yīng)用封閉液(5%脫脂奶粉)室溫封閉1h，洗膜后加入稀釋的一抗(以適當(dāng)比例稀釋)，4℃密封過(guò)夜。洗膜后，加入稀釋的二

8、抗，37℃放置1h，再洗膜后加入顯色劑進(jìn)行檢測(cè)，用凝膠圖像成像系統(tǒng)拍攝實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析ho1和gapdh蛋白條帶的吸光度值。用吸光度值代表ho1蛋白的表達(dá)量?！　?.2.3半定量rtpcr技術(shù)檢測(cè)：每只小鼠取右側(cè)肺葉，立即放入depc處理過(guò)高壓消毒的ep管中，置入液氮罐中，用于半定量rtpcr技術(shù)檢測(cè)mmp2、mmp9mrna表達(dá)。用trizol試劑提取肺組織的總rna后，檢測(cè)其完整性和濃