資源描述：
《農(nóng)桿菌介導甜高粱bar基因再生體系建立及水稻eis基因轉(zhuǎn)化概述》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、農(nóng)桿菌介導甜高粱Bar基因再生體系建立及水稻EIS基因轉(zhuǎn)化概述第一章引言1甜高粱研究概況甜高粱(Sorghumbicolor(L.)Moench)屬禾本科(Poaceae)高粱族(Andropogoneae)高粱屬(Sorghum)，也稱糖高粱，是普通高粱的一個變種。甜高粱屬C4植物，具有光合效率高、生物產(chǎn)量高、抗旱、耐澇、耐貧瘠、耐鹽堿和適應(yīng)性廣等特性，被譽為植物中的駱駝，在熱帶、亞熱帶和溫帶均可種植，主要種植在熱帶干旱、半干旱地區(qū)、高海拔低溫山區(qū)及鹽堿地區(qū)和土壤貧瘠地等地區(qū)（黎大爵，1992；楊文華等，2004）。甜高粱是一種多用途雜糧作物，其籽粒可以食
2、用和釀酒；莖稈汁液豐富、含糖量高，可用于加工生產(chǎn)糖和糖漿，還可用作青貯飼料或加工成糖化秸稈飼料，最重要的是可以用來生產(chǎn)乙醇，代替石油等化石燃料，緩解全球能源危機（王艷秋等，2004；張志鵬等，2005；嚴晉躍等，2009）。尤其是近年來，隨著國家禁止以玉米、小麥等糧食能源作物的乙醇生產(chǎn)，以甘蔗、甜菜等非糧能源作物的乙醇生產(chǎn)發(fā)展迅速。而在眾多的非糧能源作物中，甜高粱具有種質(zhì)資源豐富、抗逆性強、適應(yīng)性廣、生物產(chǎn)量高、莖稈含糖量高、乙醇轉(zhuǎn)化效率高，乙醇生產(chǎn)成本低等優(yōu)點，被認為是最具發(fā)展?jié)摿Φ哪茉醋魑铮ú芪牟?002；高士杰，2005；盧慶善，2008）。高粱被認
3、為是植物組織培養(yǎng)困難的植物之一，經(jīng)過幾十年的發(fā)展，雖然取得了很大的進步，但仍落后于水稻、小麥、玉米等單子葉作物。甜高粱的組織培養(yǎng)研究起步晚，研究的也少，相關(guān)研究報道也很少。.2水稻研究概況水稻是世界上最重要糧食作物之一，在全球溫帶、熱帶、亞熱帶和寒帶都可種植，在全球的種植面積超過16346萬公頃，產(chǎn)量超過1772萬噸，占全球作物總產(chǎn)量的24.38%（FAO，2012）。水稻已經(jīng)成為單子葉植物研究的模式植物，其遺傳轉(zhuǎn)化在品種改良、基因功能檢測和突變體篩選中的作用日益凸顯。隨著大規(guī)模的水稻基因組測序的結(jié)束和水稻序列圖譜的繪制，基因組數(shù)據(jù)庫中積累了大量的數(shù)據(jù)，功能
4、基因組的研究已經(jīng)被提上議事日程。因此，如何建立一套穩(wěn)定、高效的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)就顯得非常重要。經(jīng)過科學家們半個多世紀的不斷努力，水稻的高效遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)已經(jīng)建立，農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)也日益成熟。水稻的組織培養(yǎng)始于1955年Fujiin，倒掉共培養(yǎng)培養(yǎng)液I，加入制備好的農(nóng)桿菌懸液浸染15min，倒掉菌液，幼胚置于無菌濾紙上晾25-30min，然后接種到鋪有一層無菌濾紙的MS共培養(yǎng)培養(yǎng)基上，于28℃黑暗共培養(yǎng)2-3天。愈傷組織則直接用OD600值0.3-0.5的農(nóng)桿菌懸液浸染20min，倒掉菌液，愈傷組織置于無菌濾紙上晾35-40min，然后接種到相同的共培養(yǎng)培養(yǎng)基上
5、，相同條件下共培養(yǎng)2-3天。共培養(yǎng)2-3天后，幼胚和愈傷組織轉(zhuǎn)接到預篩選培養(yǎng)基上，在28℃黑暗培養(yǎng)5-7天，再將其轉(zhuǎn)接到含500mg/L頭孢霉素和20mg/L潮霉素的篩選培養(yǎng)基上進行篩選。每2-3周更換一次篩選培養(yǎng)基。經(jīng)4-5周的篩選培養(yǎng)，幼胚轉(zhuǎn)化獲得的抗性愈傷先轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基上繼代2-3周，待抗性愈傷組織長到直徑約5㎜大小再轉(zhuǎn)接到不含抗生素和篩選劑的分化培養(yǎng)基上進行分化培養(yǎng)；愈傷轉(zhuǎn)化獲得的抗性愈傷組織轉(zhuǎn)接到含有500mg/L頭孢霉素的分化培養(yǎng)基上進行分化培養(yǎng)，條件為25±2℃每天16/8h光照/黑暗。..第三章結(jié)果與分析........20
6、1甜高粱不同外植體愈傷誘導差異分析....201.1不同處理對成熟種子愈傷誘導的影響......201.2不同基因型和不同培養(yǎng)基對幼穗愈傷誘導的影響......221.3不同基因型和不同取材時期對幼胚愈傷誘導的影響.......252甜高粱不同外植體愈傷化差異分析........323甜高粱再生苗生根、移栽與再生植株的獲得.......384甜高粱轉(zhuǎn)Bar基因研究........434.1潮霉素濃度篩選.......434.2不同受體材料對高粱遺傳轉(zhuǎn)化的影響......444.3不同基因型對高粱遺傳轉(zhuǎn)化的影響.....455水稻成熟種子再生的影響因素....
7、..466水稻再生苗的生根、移栽與再生植株獲得......507EIS基因轉(zhuǎn)化載體的構(gòu)建與鑒定....518農(nóng)桿菌介導水稻轉(zhuǎn)EIS基因研究.......549水稻T0代轉(zhuǎn)基因植株P(guān)CR檢測.......56第四章討論.....581褐變對甜高粱植株再生的影響......582外植體類型對甜高粱植株再生的影響....583基因型對甜高粱植株再生的影響.......594不同培養(yǎng)條件對水稻成熟種子植株再生的影響........595影響高粱轉(zhuǎn)化率的因素........60第五章結(jié)論........61第四章討論1褐變對甜高粱植株再生的影響褐變在植物組織培養(yǎng)中普遍
8、存在，在高粱組織培養(yǎng)中比較嚴重。褐變可分為酶促褐變和
