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1、萬方數(shù)據(jù)獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名揪，艾動劫鋤時間：加，少年么月彥日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說明本人完全了解新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子文檔，
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3、4、28和33)下胚軸體細(xì)胞胚胎發(fā)生進(jìn)行差異研究，探討5個品種組織培養(yǎng)過程中各時期的差異，并以對新海28和新海33胚性愈傷組織為受體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行研基因的遺傳轉(zhuǎn)化，對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR檢測和GUS組織化學(xué)檢測，初步確定外源歷基因已整合到兩個海島棉品種基因組中，并進(jìn)行了表達(dá)。本研究取得的主要成果如下：以1個陸地棉和4個海島棉品種的下胚軸為外植體誘導(dǎo)愈傷組織，采用2種MSI+0．1mg／L2，4-D+0．1m∥LKT和MSI+0．3mg／LNAA+0．1mg／LKT棉花愈傷組織誘導(dǎo)實驗中常用的激素組合培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)愈
4、傷組織。實驗結(jié)果表明，O．1mg／L2，4-D+0．1mg／LKT配比下陸地棉和海島棉的愈傷組織出愈率高，0．3mg／LNAA+0．1mgCLKT配比下出愈率低而大部分愈傷組織為灰白色硬塊，這種狀態(tài)下愈傷組織很難誘導(dǎo)下面的胚性愈傷組織分化試驗。因此，本實驗0．1mg／L2，4-D+0．1mg／LKT配比為最優(yōu)誘導(dǎo)培養(yǎng)基繼續(xù)進(jìn)行誘導(dǎo)試驗。愈傷組織分化到胚性愈傷組織誘導(dǎo)全過程中，MS2培養(yǎng)基里2次或3次繼代培養(yǎng)對陸地棉和海島棉胚性愈傷組織分化效果最佳。MS3培養(yǎng)基培養(yǎng)2～3次后的胚性愈傷組織轉(zhuǎn)入到液體MS4培養(yǎng)基進(jìn)行懸浮培養(yǎng)誘
5、導(dǎo)體細(xì)胞胚。結(jié)果表明，5個棉花品種都適于懸浮培養(yǎng)誘導(dǎo)體細(xì)胞胚，4種海島棉在添加激素的Sl(0．1mg／L2,4一D+O．1mg／LKT)、S2(MS4+0．05mg／LIBA+0．1mg／LKT)和S3(0．3mg／LNAA+O．1mg／LKT)培養(yǎng)基上體胚發(fā)生率均下降，而陸地棉體胚發(fā)生率提高及加快了再生植株發(fā)育進(jìn)度，尤其在S3上。在胚性愈傷組織和非胚性愈傷組織細(xì)胞學(xué)觀察比較試驗中發(fā)現(xiàn)，海島棉愈傷組織和胚性愈傷組織的各時期細(xì)胞比陸地棉的大。海島棉愈傷組織的細(xì)胞大小無規(guī)律、細(xì)胞壁薄、細(xì)胞核位于細(xì)胞壁邊緣并液泡大，到胚性愈傷組
6、織和體細(xì)胞胚胎初期細(xì)胞與細(xì)胞間緊密連接，細(xì)胞大小比愈傷組織小。以新海28和新海33胚性愈傷為受體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，獲得了Bt基因的轉(zhuǎn)化體系，并獲得了轉(zhuǎn)化再生植株。轉(zhuǎn)化過程中500mg／L頭孢霉素和50mg／L卡那霉素抗性篩選在提高抗性胚性愈傷再生率和轉(zhuǎn)化率中效果最佳。通過對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR檢測和GUS組織化學(xué)檢測，本實驗初步驗證，獲得了8個轉(zhuǎn)基因陽性植株，且確定所轉(zhuǎn)化的外源曰f基因穩(wěn)定存在于轉(zhuǎn)化體基因組中。關(guān)鍵詞：陸地棉：海島棉；再生體系：體細(xì)胞胚胎發(fā)生；Bt基因；遺傳轉(zhuǎn)化萬方數(shù)據(jù)Establishment
7、oftheRegenerationSystemofSeaIslandCottonandStudyonAgrobacteriumtumefaciens—medtntedTransformationofBtGeneAbstractThisstudyofanuplandcottonandfourseaislandcottonvarietiessomaticembryogenesishypocotyldifferentiatestudytoexaminethedifferencesintissuecultureprocessthe
8、sefivespeciesineachperiod，andontheXinHai28andXinHai33embryogeniccallusreceptorgeneBtgenetictransformationmediatedbyAgrobacterium，throughtheexaminationof
