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《微小顆粒骨復(fù)合細胞移植治療大鼠骨缺損》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、微小顆粒骨復(fù)合細胞移植治療大鼠骨缺損 【Abstract】AIM:Toinvestigatethebinedtreatmenteffectsofautogeicminimalmorselizedboneandallogeniccellsonratcranialdefect.METHODS:Cranialdefectinratmodelsinimalmorselizedbonegraftandallogeniccelltransplantation［osteoblastsormarroalcells(MSC)］.XrayedtoexaminethemRNAexpr
2、essionsofTGFβ1andbFGF.RESULTS:IntheorderofbinedtreatmentgroupA(morselizedboneandosteoblastgraft),binedtreatmentgroupB(morselizedboneandMSCgraft),binedtreatmentgroupC(minimalmorselizedboneonly),theuniontimeofcranialdefectprolongedas(7.33±0.44)ergedintheorder(P<0.05betinimalmorselize
3、dboneandallogeniccellsacceleratetherepairmentofcranialdefectandtheexpressionofcellfactors. 【Keyinimalmorselizedbone 【摘要】目的：觀察自體微小顆粒骨復(fù)合骨髓基質(zhì)細胞（MSC）或成骨細胞移植修復(fù)大鼠骨缺損的治療效果.方法：制作大鼠顱骨缺損動物模型，培養(yǎng)同種異體新生大鼠的MSC及成骨細胞，復(fù)合自體顆粒骨后植入骨缺損區(qū)，X線攝片觀察骨愈合情況；RTPCR檢測轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGFβ1），堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)表達水平.結(jié)果：植入微小顆粒骨
4、復(fù)合成骨細胞組顱骨缺損愈合最快（7.33±0.44）L/L胎牛血清沖，CO2培養(yǎng)箱，Ⅱ型膠原酶均購自美國Sigma公司. 1．2方法將大鼠隨機分為3組：單純微小顆粒骨植入組(第1組)，微小顆粒骨復(fù)合骨髓基質(zhì)細胞（marroalcells,MSC)組(第2組)，微小顆粒骨復(fù)合成骨細胞組(第3組)，每組48只.SD大鼠處死后750mL/L乙醇浸泡5min，雙側(cè)股骨髓腔DMEM加150mL/L胎牛血清沖洗，沖洗液加入培養(yǎng)瓶中置入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)MSC.取顱蓋骨剪碎，以Ⅱ型膠原酶（1g/L）消化法［3］培養(yǎng)成骨細胞.每3d換液1次，長滿瓶后消化，1∶2傳代. 1.2
5、．1顱骨缺損的修復(fù)實驗動物取髂嵴切口，取自體髂骨約1000mg磨鉆制成直徑300~500μm的顆粒，分別取培養(yǎng)的MSC及成骨細胞，消化后調(diào)整計數(shù)5×108/L，取5mL與顆粒骨混合后37℃水浴震蕩90min備用.顱骨正中切口，顯露大鼠頂骨及額骨，左側(cè)頂骨正中制作5mm全層骨缺損，注意保持硬膜完整.顆粒骨及細胞混合液離心，將離心管底復(fù)合的顆粒骨及細胞植入骨缺損區(qū)，縫合切口.第1組：單純植入顆粒骨；第2組：植入顆粒骨及MSC；第3組植入顆粒骨及成骨細胞.植入后3,5,7,9,15,21,36和56d取材進行TGFβ1及bFGFmRNA檢測.第2,4,6,8,10,12
6、,14和16RNA檢測骨組織研碎后按TRIZOL試劑盒說明進行組織RNA提取.按文獻［4］提供的序列由上海博亞公司合成引物.TGFβ1序列：上游引物：TACATTGACTTTAGGAAGGA；下游引物：ATCATGTTGGACAACTGATCC.擴增產(chǎn)物長度252bp，βactin擴增產(chǎn)物長度500bp.bFGF序列：上游引物：GCGACCCACACGTCAAACTACAGC；下游引物：ACTGCCCAGTTCGTTTCAGTGCCA.擴增產(chǎn)物長度231bp，βactin擴增產(chǎn)物長度500bp.按說明書進行反轉(zhuǎn)錄及PCR擴增.產(chǎn)物15g/L瓊脂糖上電泳. 圖1顆
7、粒骨復(fù)合MSC缺損修復(fù)時TGFβ1mRNA的表達（略） 圖2顆粒骨復(fù)合MSC缺損修復(fù)bFGFmRNA的表達（略） 3討論 自體骨移植是治療骨缺損的有效方法，近年微小顆粒骨移植有見報告.我們發(fā)現(xiàn)復(fù)合成骨細胞后，微小顆粒骨修復(fù)骨缺損加快，其TGFβ1基因表達高峰提前，表達水平也升高，同時bFGF表達高峰也提前.復(fù)合基質(zhì)細胞后成骨效果優(yōu)于單純微小顆粒骨移植，這兩種基因的表達較單純植入顆粒骨組提前.本實驗說明自體微小顆粒骨可以和細胞結(jié)合，進行復(fù)合移植修復(fù)骨缺損，移植細胞和顆粒骨可以協(xié)同作用，提高成骨效果. 細胞和載體復(fù)合方法很多［3-5］，包括浸漬法、沉淀法、吸附
8、法、凝膠法
