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1、微小顆粒骨復(fù)合細(xì)胞移植治療大鼠骨缺損論文麻松，閻景龍，林欣，潘海濤，王新濤，楊顯生【關(guān)鍵詞】顱骨缺損；骨移植；細(xì)胞移植；微小顆粒骨Treatmentofratcranialdefectinimalmorselizedboneandallogeniccells【Abstract】AIM:Toinvestigatethebinedtreatmenteffectsofautogeicminimalmorselizedboneandallogeniccellsonratcranialdefect.METHODS:Cranialdefectinratmodelsinimalmorselize
2、dbonegraftandallogeniccelltransplantation［osteoblastsormarroalcells(MSC)］.XrayedtoexaminethemRNAexpressionsofTGFβ1andbFGF.RESULTS:IntheorderofbinedtreatmentgroupA(morselizedboneandosteoblastgraft),binedtreatmentgroupB(morselizedboneandMSCgraft),binedtreatmentgroupC(minimalmorselizedboneonly),t
3、heuniontimeofcranialdefectprolongedas(7.33±0.44)ergedintheorder(P0.05betinimalmorselizedboneandallogeniccellsacceleratetherepairmentofcranialdefectandtheexpressionofcellfactors.【Keyinimalmorselizedbone【摘要】目的：觀察自體微小顆粒骨復(fù)合骨髓基質(zhì)細(xì)胞（MSC）或成骨細(xì)胞移植修復(fù)大鼠骨缺損的治療效果.方法：制作大鼠顱骨缺損動(dòng)物模型，培養(yǎng)同種異體新生大鼠的MSC及成骨細(xì)胞，復(fù)合自體顆粒骨后
4、植入骨缺損區(qū).freelL/L胎牛血清沖，CO2培養(yǎng)箱，Ⅱ型膠原酶均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司.1．2方法將大鼠隨機(jī)分為3組：?jiǎn)渭兾⑿☆w粒骨植入組(第1組)，微小顆粒骨復(fù)合骨髓基質(zhì)細(xì)胞（marroalcells,MSC)組(第2組)，微小顆粒骨復(fù)合成骨細(xì)胞組(第3組)，每組48只.SD大鼠處死后750mL/L乙醇浸泡5min，雙側(cè)股骨髓腔DMEM加150mL/L胎牛血清沖洗，沖洗液加入培養(yǎng)瓶中置入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)MSC.取顱蓋骨剪碎，以Ⅱ型膠原酶（1g/L）消化法［3］培養(yǎng)成骨細(xì)胞.每3d換液1次，長(zhǎng)滿瓶后消化，1∶2傳代.1.2．1顱骨缺損的修復(fù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取髂嵴切口，取自體髂骨約10
5、00mg磨鉆制成直徑300~500μm的顆粒，分別取培養(yǎng)的MSC及成骨細(xì)胞，消化后調(diào)整計(jì)數(shù)5×108/L，取5mL與顆粒骨混合后37℃水浴震蕩90min備用.顱骨正中切口，顯露大鼠頂骨及額骨，左側(cè)頂骨正中制作5mm全層骨缺損，注意保持硬膜完整.顆粒骨及細(xì)胞混合液離心，將離心管底復(fù)合的顆粒骨及細(xì)胞植入骨缺損區(qū)，縫合切口.第1組：?jiǎn)渭冎踩腩w粒骨；第2組：植入顆粒骨及MSC；第3組植入顆粒骨及成骨細(xì)胞.植入后3,5,.freelRNA檢測(cè).第2,4,6,8,10,12,14和16RNA檢測(cè)骨組織研碎后按TRIZOL試劑盒說明進(jìn)行組織RNA提取.按文獻(xiàn)［4］提供的序列由上海博亞公司合成引物
6、.TGFβ1序列：上游引物：TACATTGACTTTAGGAAGGA；下游引物：ATCATGTTGGACAACTGATCC.擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度252bp，βactin擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度500bp.bFGF序列：上游引物：GCGACCCACACGTCAAACTACAGC；下游引物：ACTGCCCAGTTCGTTTCAGTGCCA.擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度231bp，βactin擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度500bp.按說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄及PCR擴(kuò)增.產(chǎn)物15g/L瓊脂糖上電泳.2結(jié)果顱骨缺損修復(fù)X線，第3組較早期既有成骨表現(xiàn)，骨缺損愈合時(shí)間為(7.33±0.44)RNA的表達(dá)（略）圖2顆粒骨復(fù)合MSC缺損修復(fù)bFGFmRNA
7、的表達(dá)（略）3討論自體骨移植是治療骨缺損的有效方法，近年微小顆粒骨移植有見報(bào)告.我們發(fā)現(xiàn)復(fù)合成骨細(xì)胞后，微小顆粒骨修復(fù)骨缺損加快，其TGFβ1基因表達(dá)高峰提前，表達(dá)水平也升高，同時(shí)bFGF表達(dá)高峰也提前.復(fù)合基質(zhì)細(xì)胞后成骨效果優(yōu)于單純微小顆粒骨移植，這兩種基因的表達(dá)較單純植入顆粒骨組提前.本實(shí)驗(yàn)說明自體微小顆粒骨可以和細(xì)胞結(jié)合，進(jìn)行復(fù)合移植修復(fù)骨缺損，移植細(xì)胞和顆粒骨可以協(xié)同作用，提高成骨效果.細(xì)胞和載體復(fù)合方法很多［3-5］，包括浸漬法、沉淀法、吸附法、凝膠法、動(dòng)態(tài)
