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1、含羞草中總黃酮提取純化工藝研究論文喬文濤，張靜，俞凌雁，馬婷婷，袁珂【摘要】目的研究提取純化含羞草中總黃酮的最佳工藝條件。方法以蘆丁為對照，含羞草總黃酮得率為考察指標，通過正交實驗法優(yōu)選超聲提取總黃酮的最佳工藝。在此基礎(chǔ)上，采用真空薄膜濃縮.freelin/次。最佳分離純化工藝為：采用大孔吸附樹脂DiaionHP-20進行分離富集，以不同濃度的乙醇進行梯度洗脫，洗脫流速為5ml/min，收集40％～60％乙醇洗脫部位并減壓濃縮得總黃酮提取物，總黃酮的含量達到76％。結(jié)論優(yōu)化了含羞草中總黃酮的提取純化方法，為含羞草資源的綜合利用和產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供了參考?！娟P(guān)鍵詞】含羞草總黃酮提取純化含羞
2、草為豆科含羞草屬植物含羞草Mimosapudica的全草［1］，又名知羞草、怕羞草、喝乎草、刺含羞草等。主要分布在我國華東、華南、西南等地的山坡叢林、濕地、路旁,具有清熱利尿、化痰止咳、安神止痛、涼血止血之功效，臨床多用于急性肝炎、神經(jīng)衰弱、失眠、肺結(jié)核咳血、血尿、結(jié)膜炎、跌打損傷、帶狀皰疹等癥［2］。含羞草中含有大量對人體有益的活性物質(zhì)，包括黃酮類、酚類、生物活性多糖、氨基酸類、有機酸類和其它微量元素。其中的黃酮類化合物具有顯著的生理活性［3～5］，如抗脂質(zhì)過氧化、抗衰老、清除自由基、抗腫瘤，降低血脂、抗菌抑菌、增強免疫力等作用。本文通過正交實驗考察了超聲提取含羞草總黃酮的工藝，同
3、時采用大孔吸附樹脂進行吸附分離，并結(jié)合真空薄膜濃縮、超聲脫色等方法對含羞草提取物進行分離與純化，以期為工業(yè)化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。1儀器與材料1.1儀器UV-2102PCS紫外可見分光光度計（上海龍尼柯儀器有限公司）；KQ-250B超聲波提取器（昆山市超聲儀器有限公司）；NJL07-3型實驗專用微波爐（南京杰全微波設(shè)備有限公司，額定功率800illiporeSimplicity型超純水器（美國Millipore公司）；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；真空薄膜濃縮裝置［6］（自裝）；101-1型電熱恒溫干燥箱；微量分析天平（EETTLERAE240瑞士），微孔濾膜（上海醫(yī)藥工
4、業(yè)研究院）；蘆丁對照品（中國藥品生物制品鑒定所提供）。1.2材料與試劑含羞草于2003-05采自海南三亞,由海南大學植物學教授黃世滿鑒定為豆科含羞草屬植物含羞草的全植株；所用試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1標準曲線的繪制準確稱取干燥恒重的蘆丁對照品12.8mg，加60%乙醇（體積分數(shù)，下同）溶解并定容置100ml的量瓶中，搖勻得質(zhì)量濃度為0.128g/L的對照品溶液。分別取上述蘆丁標準溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml于6只10ml量瓶中，用60%乙醇補充至5ml，各加入0.3ml5%亞硝酸鈉，搖勻，放置5min后各加入10%硝酸鋁0.3ml，搖勻。5min后再加入
5、1mol/ml的氫氧化鈉溶液4ml，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度。10min后于510nm處測吸光度，試劑為空白參比，以蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，用最小二乘法進行線行回歸,得蘆丁含量與吸光度之間的回歸方程:A=9.0491C+0.0064,r=0.9997。2.2不同溶劑提取所得提取物得率及總黃酮得率的比較2.2.1不同溶劑提取所得提取物的得率比較稱取粉碎并過60目篩后的含羞草原料4份，每份20g，分別選用50%的乙醇、80%的乙醇、甲醇、70%的丙酮4種不同的溶劑進行索氏提取，溶劑用量均為200ml，提取時間為5h。分別將提取液濃縮至稠膏狀移入烘箱中烘干至恒
6、重。稱重，計算得率。結(jié)果見表1。表1不同溶劑提取所得提取物及得率的比較（略）2.2.2不同溶劑提取所得總黃酮的得率比較分別吸取一定量由不同溶劑提取所制得的含羞草提取液于10ml量瓶中，添加60%乙醇溶液使體積約為5ml，按照上述繪制蘆丁標準曲線的方法，依次加入0.3ml5%亞硝酸鈉、0.3ml10%硝酸鋁、4ml1mol/ml的氫氧化鈉溶液，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度。靜置20min后用紫外可見分光光度計法測定不同溶劑提取所得提取液的吸光度，重復(fù)3次測定，并根據(jù)標準曲線換算出總黃酮的得率，計算平均含量及RSD。結(jié)果見表2。表2不同溶劑提取所得提取物中總黃酮的得率比較（略）由表1可以
7、看出，由4種不同的溶劑進行索氏提取，以70%丙酮進行提取所得提取物的得率為最高；由表2可以看出，以80%乙醇為溶劑進行提取，所得提取物中總黃酮得率相對最高。雖然以70%丙酮提取得率最高且總黃酮的得率與用80%乙醇提取相當，但考慮到乙醇與丙酮相比，具有無毒安全，廉價易得的優(yōu)點，故提取溶劑選用80%乙醇。2.3超聲提取工藝的優(yōu)選2.3.1樣品溶液的制備與測定分別精密稱定干燥并過60目篩的含羞草粗粉9份，每份20.00g，以80%乙醇為溶劑，按正交實驗表中所選取
