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1、含羞草中總黃酮提取純化工藝研究作者：?jiǎn)涛臐?，張靜，俞凌雁，馬婷婷，袁珂【摘要】 目的研究提取純化含羞草中總黃酮的最佳工藝條件。方法以蘆丁為對(duì)照，含羞草總黃酮得率為考察指標(biāo)，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選超聲提取總黃酮的最佳工藝。在此基礎(chǔ)上，采用真空薄膜濃縮，超聲脫色，大孔吸附樹(shù)脂DiaionHP-20吸附分離純化含羞草總黃酮提取物。結(jié)果最佳提取工藝為用10倍量的80%乙醇為溶劑超聲提取3次，10min/次。最佳分離純化工藝為：采用大孔吸附樹(shù)脂DiaionHP-20進(jìn)行分離富集，以不同濃度的乙醇進(jìn)行梯度洗脫，洗脫流速為5ml/min，收集40％～60％乙醇洗脫部位并
2、減壓濃縮得總黃酮提取物，總黃酮的含量達(dá)到76％。結(jié)論優(yōu)化了含羞草中總黃酮的提取純化方法，為含羞草資源的綜合利用和產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)提供了參考?！娟P(guān)鍵詞】含羞草總黃酮提取純化含羞草為豆科含羞草屬植物含羞草Mimosapudica的全草［1］，又名知羞草、怕羞草、喝乎草、刺含羞草等。主要分布在我國(guó)華東、華南、西南等地的山坡叢林、濕地、路旁,具有清熱利尿、化痰止咳、安神止痛、涼血止血之功效，臨床多用于急性肝炎、神經(jīng)衰弱、失眠、肺結(jié)核咳血、血尿、結(jié)膜炎、跌打損傷、帶狀皰疹等癥［2］。含羞草中含有大量對(duì)人體有益的活性物質(zhì)，包括黃酮類、酚類、生物活性多糖、氨基酸類、有機(jī)酸類
3、和其它微量元素。其中的黃酮類化合物具有顯著的生理活性［3～5］，如抗脂質(zhì)過(guò)氧化、抗衰老、清除自由基、抗腫瘤，降低血脂、抗菌抑菌、增強(qiáng)免疫力等作用。本文通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)考察了超聲提取含羞草總黃酮的工藝，同時(shí)采用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附分離，并結(jié)合真空薄膜濃縮、超聲脫色等方法對(duì)含羞草提取物進(jìn)行分離與純化，以期為工業(yè)化生產(chǎn)提供參考依據(jù)?！ ?儀器與材料 1.1儀器UV-2102PCS紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海龍尼柯儀器有限公司）；KQ-250B超聲波提取器（昆山市超聲儀器有限公司）；NJL07-3型實(shí)驗(yàn)專用微波爐（南京杰全微波設(shè)備有限公司，額定功率800illipor
4、eSimplicity型超純水器（美國(guó)Millipore公司）；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；真空薄膜濃縮裝置［6］（自裝）；101-1型電熱恒溫干燥箱；微量分析天平（EETTLERAE240瑞士），微孔濾膜（上海醫(yī)藥工業(yè)研究院）；蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供）。 1.2材料與試劑 含羞草于2003-05采自海南三亞,由海南大學(xué)植物學(xué)教授黃世滿鑒定為豆科含羞草屬植物含羞草的全植株；所用試劑均為分析純?！ ?方法與結(jié)果 2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 準(zhǔn)確稱取干燥恒重的蘆丁對(duì)照品12.8mg，加60%乙醇（體積分?jǐn)?shù)，下同）溶解并定容
5、置100ml的量瓶中，搖勻得質(zhì)量濃度為0.128g/L的對(duì)照品溶液。分別取上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml于6只10ml量瓶中，用60%乙醇補(bǔ)充至5ml，各加入0.3ml5%亞硝酸鈉，搖勻，放置5min后各加入10%硝酸鋁0.3ml，搖勻。5min后再加入1mol/ml的氫氧化鈉溶液4ml，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度。10min后于510nm處測(cè)吸光度，試劑為空白參比，以蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用最小二乘法進(jìn)行線行回歸,得蘆丁含量與吸光度之間的回歸方程:A=9.0491C+0.0064,r=0.9
6、997?！ ?.2不同溶劑提取所得提取物得率及總黃酮得率的比較 2.2.1不同溶劑提取所得提取物的得率比較 稱取粉碎并過(guò)60目篩后的含羞草原料4份，每份20g，分別選用50%的乙醇、80%的乙醇、甲醇、70%的丙酮4種不同的溶劑進(jìn)行索氏提取，溶劑用量均為200ml，提取時(shí)間為5h。分別將提取液濃縮至稠膏狀移入烘箱中烘干至恒重。稱重，計(jì)算得率。結(jié)果見(jiàn)表1。表1不同溶劑提取所得提取物及得率的比較（略） 2.2.2不同溶劑提取所得總黃酮的得率比較 分別吸取一定量由不同溶劑提取所制得的含羞草提取液于10ml量瓶中，添加60%乙醇溶液使體積約為5ml，按照
7、上述繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，依次加入0.3ml5%亞硝酸鈉、0.3ml10%硝酸鋁、4ml1mol/ml的氫氧化鈉溶液，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度。靜置20min后用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)法測(cè)定不同溶劑提取所得提取液的吸光度，重復(fù)3次測(cè)定，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出總黃酮的得率，計(jì)算平均含量及RSD。結(jié)果見(jiàn)表2。表2不同溶劑提取所得提取物中總黃酮的得率比較（略） 由表1可以看出，由4種不同的溶劑進(jìn)行索氏提取，以70%丙酮進(jìn)行提取所得提取物的得率為最高；由表2可以看出，以80%乙醇為溶劑進(jìn)行提取，所得提取物中總黃酮得率相對(duì)最高。雖然以70%丙酮提取得率最高且總黃酮
8、的得率與用80%乙醇提取相當(dāng)，但考慮到乙醇與丙酮相比，具有無(wú)毒安全，廉價(jià)易得的優(yōu)
