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1、絞股藍總皂苷提取工藝研究論文.freelma.MethodAccordingtothetotalsaponinextractingrate,theextractingtechniquesizedbyorthogonaldesign.ResultsThefactorsthatextractingtimeandextractingtimeshavesignificanteffectontotalsaponinextraction,andtheamountofalcoholsolutionhasinsignificanteffectoni
2、t.ConclusionTheoptimalextractingtechniquesese.Keymatotalsaponin;extractingtechniques;orthogonaldesign絞股藍(Gynostemma)為葫蘆科絞股藍屬多年生蔓生草本植物,主要含有皂苷、黃酮、多糖,還含有人體必須的多種氨基酸、維生素和微量元素等成分?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,絞股藍具有抑制腫瘤、抗衰老、降低血脂、增強免疫力和保護心臟的作用1。絞股藍總皂苷片作為藥品已經(jīng)上市多年,.freelg置5mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成濃
3、度為2.0mg/mL的儲備液。精密量取儲備液50、100、150、200、250μL分別置15mL具塞試管中,揮干甲醇,分別加入新配置的5%香草醛冰醋酸溶液0.4mL、高氯酸1.6mL,搖勻,密塞,置60℃水浴中加熱15min后取出,立即用冷水冷卻至室溫,分別精密加入冰醋酸10mL,搖勻,作為供試品溶液。另精密量取甲醇溶液250μL置15mL具塞試管中,按照上述操作,到加入冰醋酸10mL搖勻為止,作為空白溶液。取供試品溶液和空白溶液,照分光光度法《中華人民共和國藥典》(一部)附錄ⅦA試驗,在560nm的波長處分別測定吸收度。以人參皂
4、苷Rb1的量X(mg)對吸收度A進行回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A=1.2757X+0.0019,r=0.9989。結(jié)果表明,當(dāng)取樣量在0.102~0.510mg范圍內(nèi)時,人參皂苷Rb1的含量與吸收度呈良好的線性關(guān)系。2.2絞股藍總皂苷含量測定方法精密稱取絞股藍總皂苷粉末20mg置5mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻。精密量取200μL置15mL具塞試管中,揮干甲醇后按“2.1”項下操作,測定吸收度,用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出絞股藍總皂苷的含量。2.3絞股藍總皂苷的提取工藝將干燥的絞股藍藥材粉碎成粗粉,準(zhǔn)確稱量100g置圓底燒瓶中,用70
5、%乙醇多次回流提取,合并提取液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后減壓干燥,干燥物用1000mL的熱水充分溶解,加入同體積的石油醚萃取3次,將水層溶液用同體積的水飽和的正丁醇反復(fù)萃取,至正丁醇層無色為止,合并正丁醇提取液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后減壓干燥,即得。2.4絞股藍總皂苷提取工藝的正交設(shè)計根據(jù)初步試驗結(jié)果,選用L9(34)正交試驗表,以乙醇用量(A)、提取時間(B)、提取次數(shù)(C)為試驗因素,每個因素取3個水平(見表1)。取樣品,按照正交設(shè)計進行實驗,以絞股藍總皂苷的提取量為考察指標(biāo),進行提取工藝的優(yōu)選。表1正交試驗因素水平表(略)2.5絞股藍總
6、皂苷提取工藝的穩(wěn)定性試驗按照正交試驗選擇的工藝條件,重復(fù)進行絞股藍總皂苷的提取,并依法測定絞股藍總皂苷的含量,評價正交試驗選擇的工藝條件是否穩(wěn)定。3結(jié)果3.1正交試驗結(jié)果按表1的因素水平設(shè)計,正交試驗結(jié)果見表2,方差分析見表3。由表2中極差的直觀分析法R值可以看出,因素B的極差0.56為最大,說明它是A、B、C三因素中對絞股藍總皂苷提取影響最大的因素,其次是因素C,它的極差為0.47,這3個因素對絞股藍總皂苷提取的影響由大到小的順序依次為BCA。由表3的方差分析結(jié)果可以看出,在α=0.1的水平上,B因素和C因素對絞股藍總皂苷提取有顯
7、著性影響,A因素的影響不顯著。結(jié)合表2和表3的分析可以得出最佳工藝條件為A1B3C3,即藥材加8倍量70%的乙醇,回流提取3次,每次2h,。表2正交試驗結(jié)果(略)3.2絞股藍總皂苷提取工藝的穩(wěn)定性試驗結(jié)果為了驗證正交試驗優(yōu)選的工藝條件的穩(wěn)定性,稱取3份100g絞股藍藥材,分別按照最佳工藝條件A1B3C3操作。合并回流提取液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后減壓干燥,干燥物用1000mL的熱水充分溶解,加入同體積的石油醚萃取3次,將水層溶液用同體積水飽和的正丁醇反復(fù)萃取,至正丁醇層無色為止,合并正丁醇提取液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓干燥濃縮。平行操作,依法
8、測定絞股藍總皂苷的含量,結(jié)果見表4。表3方差分析表(略)表4絞股藍總皂苷提取工藝穩(wěn)定性試驗結(jié)果(略)4討論本實驗以絞股藍總皂苷提取量為參考指標(biāo),對絞股藍總皂苷的提取工藝進行了優(yōu)選,優(yōu)選的最佳工藝條件為A1B3C3。按照最佳工藝條件進行