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《混合酶消化法檢驗(yàn)?zāi)缢琅K器硅藻的實(shí)驗(yàn)性研究論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、混合酶消化法檢驗(yàn)?zāi)缢琅K器硅藻的實(shí)驗(yàn)性研究論文.freelentalstudyondetectionofdiatomindroulti-enzymaticdigestionmethod【Abstract】ObjectiveThepurposeofthisstudyistoevaluatethereliabilityandapplicabilityofquantitativeandqualitativediatomanalysisbymulti-enzymaticdigestionmethodinthedi
2、agnosisofdroples，normalcontrolsamples，controlsamplesofexperimentandexperimentalsamples.Organsamplesicalandmulti-enzymaticmethods，thefirstoneusingconcentratednitricacidandthesecondconglomerateofseveralenzyme.ResultsTheconglomerateofcollagenaseI.freelerate
3、ofcollagenaseⅡ，proteinaseK，hyaluronidaseandtrypsinisbestindigestingliverkidneythanother.TheconglomerateofcollagenaseI，collagenaseⅡ，hyaluronidaseandtrypsinisbestindigestingspleenthanother.Thenumberofdiatomsrecoveredulti-enzymaticdigestionmethodorethanchem
4、icalmethod，andtherateofdetectionishigher.ConclusionOurexperienceulti-enzymaticmethodseemedtobemoreexcellentintermsofrapidity，safetyandenvironmentalprotectionthanchemicaldigestion.Theauthorssuggestthatdiatomanalysisusingmulti-enzymaticdigestionoforganscan
5、beusedasacriterionforpositivediagnosisofdroinalscienceandtechnology.【Keyulti-enzyme；digestion；diatom；droin；正常對照組4只（B組），斷頸處死；實(shí)驗(yàn)組對照組4只（C組），斷頸處死后投入含已知硅藻種類的水中；實(shí)驗(yàn)?zāi)缢澜M4只（D組），溺死于含硅藻土的水中，溺死過程為5min。1.3.2操作步驟分別取各種臟器1g剪碎后置于10ml試管中，加入TES［取2MTris-HCl（pH=7.5）5ml，0.5MED
6、TA10ml，5MNaCl20ml，加滅菌蒸餾水1000ml。終濃度：10mMTris，100mMNaCl，5mMEDTA］緩沖液3ml、SDS(十二烷基硫酸鈉，10%)溶液0.3ml和選用的酶溶液200μl，置45℃恒溫箱內(nèi)觀察3～6h，待液體近透明（無明顯固體）時(shí)，加入3ml蒸餾水，混勻后離心、去上清涂片鏡檢。1.3.3強(qiáng)酸消化法取B組、C組和D組大鼠的肺臟、肝臟、腎臟及脾臟等臟器，按文獻(xiàn)報(bào)道所示步驟進(jìn)行消化［2］。1.3.4酶選擇實(shí)驗(yàn)筆者應(yīng)用了市面上常見且價(jià)格合理的8種生物酶進(jìn)行了選擇性試驗(yàn)，取A
7、組大鼠的各種臟器，剪碎后分別加入有標(biāo)記的試管中，每只試管加入一種酶（濃度暫定為20mg/ml），按1.3.2所示步驟進(jìn)行消化。1.3.5消化靈敏度實(shí)驗(yàn)按1.3.4步驟將選擇后酶的濃度分成40mg/ml、20mg/ml、10mg/ml和5mg/ml，取A組大鼠的肝臟、肺臟、脾臟及腎臟，按1.3.2所示步驟進(jìn)行消化。1.3.6酶組合消化臟器試驗(yàn)取B組、C組和D組大鼠的肝臟、肺臟、脾臟及腎臟等，根據(jù)1.3.4和1.3.5的結(jié)果選擇幾種酶類配制一定濃度后按1.3.2所示步驟進(jìn)行消化。2結(jié)果通過肉眼觀察，將各種酶
8、的消化能力分成4級，分別用羅馬數(shù)字Ⅰ～Ⅳ級表示。Ⅰ級表示消化能力最強(qiáng)，Ⅳ級表示消化能力最弱，具體意義如下：Ⅰ級：液體中可見少許固體物質(zhì)，約10％；Ⅱ級：液體中剩約25％的固體物質(zhì)；Ⅲ級：液體中剩約50％的固體物質(zhì)；Ⅳ級：液體中剩約75％的固體物質(zhì)。2.1酶選擇試驗(yàn)見表1。從表1中可以看出：(1)肺：胰蛋白酶、蛋白酶K和膠原酶的消化能力均達(dá)到Ⅰ級，膠原酶/分散酶和透明質(zhì)酸酶消化肺臟的消化能力可達(dá)到Ⅱ級；(2)肝：蛋白酶K和膠原酶Ⅱ的消化能力均
