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《子宮內(nèi)膜癌組織中fhit基因啟動(dòng)子區(qū)域cpg島甲基化狀況的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、子宮內(nèi)膜癌組織中FHIT基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島甲基化狀況的研究【關(guān)鍵詞】子宮內(nèi)膜 摘要目的:檢測子宮內(nèi)膜癌組織中FHIT基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的甲基化狀況，分析其與臨床病理特征之間的關(guān)系，探討FHIT基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的甲基化在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:采用甲基化特異的PCR方法對(duì)亞硫酸氫鹽修飾過的35例子宮內(nèi)膜癌組織、癌旁組織及患者自身外周血白細(xì)胞DNA和20例非癌患者子宮內(nèi)膜組織DNA的FHIT基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的甲基化狀況進(jìn)行分析。結(jié)果:癌組織中FHIT基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的甲基化率為25.71%，癌旁組織和外周血中也存在相似的甲基化率。非癌患者的子宮內(nèi)膜
2、組織中FHIT基因的CpG島無甲基化。癌組織與非癌患者子宮內(nèi)膜組織的甲基化率之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。DNA甲基化與臨床病理特征之間無相關(guān)性。FHIT基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的甲基化為子宮內(nèi)膜癌發(fā)生中的早期事件。結(jié)論:子宮內(nèi)膜癌組織中存在FHIT基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的甲基化，CpG島的甲基化與臨床病理特征之間無相關(guān)性。DNA甲基化為子宮內(nèi)膜癌發(fā)生中的早期事件。癌旁組織和外周血可用于癌相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島甲基化的檢測。關(guān)鍵詞子宮內(nèi)膜癌;腫瘤抑制基因;DNA甲基化;MSP;FHIT子宮內(nèi)膜癌（endometrialcarcinoma，EC）是女性生殖器官最常見的惡
3、性腫瘤之一，其發(fā)病率近年在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢［1］。從分子水平探討子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制，是近年來婦科腫瘤研究中的熱點(diǎn)。現(xiàn)有研究［2］已確切證明DNA甲基化是腫瘤抑制基因（tumorsuppressorgenes，TSGs）失活的第三種機(jī)制，而且在某些情況下是抑癌基因失活的唯一機(jī)制。為此，我們對(duì)子宮內(nèi)膜癌組織中FHIT基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的甲基化（簡稱啟動(dòng)子甲基化）狀況進(jìn)行檢測，以分析探討其在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中的作用。1資料與方法1.1臨床資料選取山東大學(xué)齊魯醫(yī)院婦科2003年1月～2003年10月間臨床病理資料完整的35例子宮內(nèi)膜癌手術(shù)病人的子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本，病理類型參
4、照國際婦科病理協(xié)會(huì)（ISGP）1988年制定的標(biāo)準(zhǔn)分為:子宮內(nèi)膜樣腺癌27例占77.14%，非腺癌8例占22.86%（透明細(xì)胞癌4例，腺鱗癌3例，未分化癌1例）。手術(shù)-病理分期和病理分級(jí)按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）1988年制定的標(biāo)準(zhǔn)分為:Ⅰ期24例占68.57%（Ⅰa期2例，Ⅰb期18例，Ⅰc期4例），Ⅲ期11例占31.43%（Ⅲa期6例，Ⅲc期5例）;G112例占34.29%，G214例占40.00%，G39例占25.71%。絕經(jīng)前患者5人占14.29%，絕經(jīng)后患者30人占85.71%。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療或激素治療。子宮內(nèi)膜癌患者的發(fā)病年齡為43歲～73歲，平均年
5、齡（57.6±6.9）歲，中位年齡57歲。35例子宮內(nèi)膜癌中，12例同時(shí)采集了癌旁正常組織，其余23例則提取自身外周血白細(xì)胞DNA，同時(shí)用于甲基化檢測。另收集功血或不孕癥患者刮宮所得的子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本20例用作正常對(duì)照，其年齡為25歲～59歲，平均（41.9±13.6）歲。對(duì)照組子宮內(nèi)膜組織的病理類型包括月經(jīng)期、增生期、分泌期子宮內(nèi)膜和單純性增生子宮內(nèi)膜。所有病理診斷均由同一名病理學(xué)專家復(fù)查并核實(shí)。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1標(biāo)本的留取和DNA的提取:腫瘤患者的組織標(biāo)本于術(shù)中子宮離體后即刻按無菌原則采集，并立即凍存于-80℃冰箱中待用?？鼓庵苎杉罅⒓措x心，使之分為血漿和白、紅細(xì)
6、胞三層后-80℃凍存。刮宮所得子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本也于術(shù)后立即采集并于-80℃凍存。組織標(biāo)本DNA的提取方法按Roche公司HighPurePCRTemplatePrepa-rationKit的說明和程序操作，外周血標(biāo)本DNA的提取按Qiagen公司的產(chǎn)品說明和程序操作。1.2.2DNA的修飾方法:每份樣本取1μg/100μL的DNA100μL按Intergen公司的CpGenomeDNAModificationKit說明和程序?qū)NA進(jìn)行亞硫酸氫鹽修飾。1.2.3甲基化特異性PCR（MSP）:12.5μL熱啟動(dòng)PCR的反應(yīng)體系包括去離子水，10×PCRbuffer，2.5mMMgC
7、l2，2.5mMdNTP，AmpliTaq-Gold酶（PE公司，5u/μL）及修飾過的DNA模板。PCR循環(huán)參數(shù)為:預(yù)變性，95℃，10min;變性，94℃，30s;退火，68℃，45s;延伸，72℃，45s;45個(gè)循環(huán)后，72℃延伸10min。引物（由香港中文大學(xué)癌癥中心惠贈(zèng)）序列為:甲基化引物M-F:TTGGGGCGCGGGTTTGGGTTTTTACGC，M-R:CGTAAACGACGCCGACCCCACTA;非甲基化引物U-F:TTGGGGTGTGGGTTTGGGTTTT
